RNA isolation 과 RT-PCR
- 최초 등록일
- 2010.08.24
- 최종 저작일
- 2009.11
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소개글
RNA isolation 실험 및 RT- PCR 에 관한 레포트 입니다.
A+ 레포트 입니다.
목차
◎Abstract
◎Introduction
◎Material & methods
◎Data & Result
◎Discussion
◎Reference
본문내용
◎Abstract
이번 실험에서는 E.coliDH5α를 배양한 뒤 total RNA를 분리하고, M-MLV RTase를 사용하여 RNA를 RT-PCR을 통해서 cDNA를 만들었다. 먼저 TRIZOL을 사용해 균질화 시킨 뒤, chloroform으로 RNA와 DNA을 분리시키고, isopropanol로 RNA를 침전시킨다. 다음으로 에탄올로 RNA를 씻어준 뒤 DEPC water에 다시 녹인 다음, spectrophotometer로 흡광도를 측정해 RNA의 양과 질을 측정한다. 그 결과 RNA의 A260/A280=1.72로 1.8에 가까우므로 순도는 나쁘지 않았다.
다음으로는 분리한 total RNA에 random primer를 조립시킨 뒤 M-MLV RTase, M-MLV RTase reaction buffer, DTT, dNTP, RNase inhibitor 등을 넣어서 cDNA로 역전사 시킨다. 반응을 마친 뒤에는 다음 실험을 위해 냉동 보관한다.
◎Introduction
RNA는 DNA에 비해 불안정하기도 하지만, RNA를 파괴하는 RNase라는 효소가 있는데, 이 효소는 적당히 끓이는 방법으로도 제거할 수가 없으며 실험자의 손이나 여타 실험환경에도 자욱하다. 따라서 RNA의 분리 시에는 다음과 같은 원칙에 유의해야 한다. 우선 RNase로부터 RNA를 보호한다. 주위 환경의 RNase contamination 방지하기 위해서 시약에 DEPC라는 RNase inhibitor를 처리한다. 용기는 대개 1회용을 쓰고, 어쩔 수 없는 경우 autoclave, baking 등을 이용한다. 또 장갑을 착용하고 RNA work 만을 위한 용기를 쓴다. 또한 세포가 파괴되면서 나오는 endogenous RNase를 억제해주어야 한다. Guanidine HCl, Guanidinium thiocyanate와 같은 물질이 그 역할
참고 자료
없음