단백질 및 아미노태질소 분석

목차

1. 실험원리

2. 실험목적

3. 실험 재료 및 방법
3.1 실험 재료
3.2 실험 방법

4. 실험 결과 및 고찰
4.1 Bradford assay
4.2 아미노태질소 측정(성숙도 측정, Formol 적정법)

본문내용

1. 실험원리
Bradford assay는 Coomassie Brilliant Blue라는 염색약과 염기성 아미노산이 결합하여 파란색으로 변하고, 최대흡수파장이 595nm로 옮겨지는 것을 이용하여 단백질의 농도를 측정하는 방법이다. BSA(Bovine Serum Albumin)로 표준곡선을 그려 그것을 기준으로 하여 시료 속 단백질 함량을 구할 수 있다.

아미노산은 양성 전해질이기 때문에 수용액에서 산이나 알칼리로 직접 적정할 수 없다. 그러나 중성 수용액에서 아미노산과 포름알데하이드가 만나면 아미노산의 아미노기와 포름알데하이드가 반응하여 아미노기의 염기성이 없어지고 카복실기의 산성만 남아 산성이 된다. 따라서 이 상태에서 알칼리 표준용액으로 적정하면 아미노태질소량을 계산할 수 있다.

2. 실험목적
- Bradford법의 원리를 이해하고, Bradford법 실습 결과값을 이용해 표준검량곡선을 그리고 단백질 농도를 도출할 수 있다.
-아미노태질소 측정법의 원리를 이해하고, 실험값을 통해 질소 농도를 계산할 수 있다.

3. 실험 재료 및 방법
3.1 실험 재료
3.11 Bradford assay
Bradford reagent, Bovine Serum Albumin(BSA), 증류수, 큐벳(플라스틱), pipette, vortex mixer, 저울, 분광광도계, 부피플라스크, falcon tube, 간장 시료
3.12 아미노태질소 측정 (성숙도 측정, Formol 적정법)
중성 포름알데히드 용액 (35%), 삼각플라스크, 0.1N NaOH, 1% 페놀프탈레인 용액, 뷰렛, 피펫 에이드 (25 mL, 10 mL), 부피플라스크, 간장시료

3.2 실험 방법
3.21 Bradford assay
Falcon에 준비된 10mg/mL BSA용액 8mL를 증류수로 희석시켜 0.8mg/mL 농도의 BSA stock solution 100mL를 만든다.

참고 자료

노봉수, 실무를 위한 식품분석학, 수학사
Ceirwyn S. James, 알기 쉬운 식품분석화학, 광문각
이외숙, 응용통계학 입문, 경문사