Restriction of DNA

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
이번 실험은 3가지 제한효소(Nde1, EcoR1, Xho1)를 이용하여 Plasmid DNA를 자르는 실험이었다. 각 제한효소는 다른 위치에서 DNA를 자르므로 3가지 DNA 단편을 얻게 된다. 이를 Agarose gel 전기영동을 통해 크기를 분석하고 전기영동 장치의 원리를 이해한다.

2. Experiment
 시약 및 장치
- Plasmid DNA(pET-22b(+))
- 10X H buffer : 10X H buffer의 조성은 Tris-HCl(적절한 pH 유지), (제공), (이온 농도 조절), DDT(Dithiothreitol, 환원제로 효소를 안정화시킴)로 이루어져 있다. 이번 실험에서는 완충제로 효소가 원활한 활성을 할 수 있게 하는 환경을 조성하는 역할을 한다. 10X는 10배 농축된 것을 의미하므로 전체 용액의 1/10배로 희석하여 사용한다.
- DDW : Double Distilled Water로 물에 들어있는 이온의 농도가 극히 낮은 증류수를 말한다. 최종 농도를 맞추기 위해 사용한다.
- Restriction Enzyme (Nde1, EcoR1, Xho1)
- PCR tube, Incubator, Electrophoresis apparatus, Electrophoresis agarose, UV transilluminator, DNA ladder, DNA loading star(6X), 1X TAE buffer, Micropipette

 실험 방법
① Table 1의 조성으로 반응 용액을 만든 후 10 pipette으로 섞어준다. 이때 넣는 순서는 위에서부터 차례대로 넣어준다.
② 37℃에서 1시간동안 반응한다.
③ 전기영동 기기에 Agarose gel을 넣고 1X TAE buffer를 gel이 잠길 때까지 채운다.
④ Agarose gel의 첫 번째 홈에 DNA ladder 10를 loading한다.

참고 자료

“2019 생물화학공학이론 및 실험” 실험 노트
DYNE BIO “DNA 전기영동”
google 이미지, 위키백과
Jane B.Reece 외 5명, 2012, “생명과학”, 바이오사이언스, p398-401
유민 외 2명, 2012, “미생물 실험서”, 보문각, p54-56
pET-22b(+), 학부실험용 유전자 서열 protocol