Plasmid mini-prep & Restriction enzyme & Electrophoresis

소개글

실험제목 : Plasmid mini-prep & Restriction enzyme & Electrophoresis
실험목적 : 형질전환 DH5α E.coli cell에서 배양시킨 TA:GBP와 형질전환 되지 않은 TA self를 꺼내서 그 안에 단백질이나 원래 E.coli가 가지고 있던 선형의 DNA를 제거해서 각각 TA self와 TA:GBP만 남긴다.
그리고나서 DNA 농도 측정 후 제한효소 자르기 과정을 통해 TA와 GBP가 나누어지도록 한 후 그 결과를 전기영동을 통해 확인한다.

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험재료
4. 실험원리
5. 실험방법
6. 실험결과 및 고찰

본문내용

실험재료 :
⦁ Sol I (Resuspension) : 세포벽 분해
- TE buffer
- RNase A : 원래 E.coli가 가지고 있던 선형의 DNA를 제거하기 위해서

⦁ Sol II (Lysis / Denaturation) : 세포막 용해
- 2N NaOH : 용액을 높은 pH상태로 만들어 plasmid DNA와 genome DNA 모두 변성
(genome DNA에 영향이 더 크다.)
- 10 % SDS : 계면활성제로 세포막의 인지질을 녹이고 세포단백질을 변성 및 제거

⦁ Sol III (Neutralization / Renaturation)
- 5 M potassium acetate : 침전
- glacial acetic acid : 중성화
Sol Ⅱ까지 높아진 pH를 낮춰서 플라스미드와 genome DNA 모두 renaturation 시킨다. 그런데 이 과정에서 size가 작은 플라스미드 DNA는 제대로 renaturation되지만 size가 큰 genome DNA는 미처 renature 되지 못하고 엉켜서 SDS에 의해서 변성된 단백질과 함께 침전된다.

참고 자료

1)http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/bilogy/transformation.html
2)http://www.genehunters.co.kr/Training/01_2_1.htm