형질전환 레포트

목차

1. 실험 목표
2. 재료 및 기구
3.vector (벡터)
4. 결과
5. 고찰

본문내용

(1)세포내에서 자가복제를 한다
(2)항생제를 이용한 선택이 가능하다
(3) multiple cloning site(MCS)를 이용할 수 있게 한다.
MCS는 제한효소로 자를 시 replication origin이나 antibiotics resistance gene같은 중요한 부분들이 잘리지 않게 하기 위해서 제한효소로 잘릴 수 있는 부위를 한꺼번에 모아놓은 부분이다.
(4)vector 부위를 이용한 DNA sequencing, 단백질 발현 등을 할 수 있게 한다.
4)Plasmid (플라스미드)
Plasmid DNA란 염색체 밖에 존재하는 DNA(extra chromosomal small circular DNA)이다.
Plasmid는 한 세포에서 다른 세포로 옮겨갈 수 있는 성질을 지니고 있으므로 유전자를 옮기는 운반 혹은 vector로 작용한다. 즉 외부에서 연구하고자 하는 DNA조각을 plasmid에 삽입하여 연결시킨 후 박테리아에 넣어주면 형질전환 된 세포내에서 DNA는 독자적으로 복제되므로 DNA조각을 cloning 하는 vector로 이용할 수 있는 것이다. 하지만 이때에 외부 DNA가 오래 유지되기 위해선 plasmid에 2가지 조건이 필요하다 하나는 플라스미드가 자가복제할 때 처음 인식하는 부위인 origina of replication이고 다른 하나는 항생제에 내성을 나타내는 유전자부위인 selection marker(영양요구균주,항생제마커) 이다. B-lactomase는 항생제가 지니고 있는 lactam ring을 깨는 역할을 하므로 항생제가 있는 배지에서 살아남았는지 여부로 DNA가 잘 도입 되었는지를 알게 해주는, selection시 가장 중요한 역할을 하는 부위이다.
5)selection (항생제를 이용한 선택)
예를 들어 1ng의 pUC8으로 1,000~10,000 형질전환체(transformant)가 생길 수 있지만 이것은 유용한 분자 전체의 0.01%에 불과하다. 게다가 10,000 형질전환체는 수용세포 배양물에 존재하는 전체 세포 수의 매우 작은 비율이다. 따라서 플라스미드를 uptake한 세포를 구별해야 할 필요가 있다.

참고 자료

생세포에서의 DNA 도입(형질전환 : Transformation)|작성자 Canvas
분자생물학, 한국분자생물학회, 아카데미서적, 1997
실험생화학, 한국생화학회 교재편찬위원회, 1996