protease 활성도 측정

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식품영양학과 식품화학과 기능성 실험 중 protease 활성도 측정

본문내용

1. 실험제목 : protease의 활성도 측정

2. 실험자명 :

3. 실험의 원리 : Protease를 적당한 농도의 casein 용액에 작용시킨다. 단백질 제거제인 trichloroacetic acid를 가하여 미분해의 단백질을 침전시켜 제거한 용액에 Folin 시약을 가하면 생성된 tyrosine에 의하여 반응액이 청색으로 착색된다. 이것을 분광광도계에 의하여 비색정량하는 방법이다. O.D. 값이 높을수록 단백질이 분해되어 생성된 tyrosine의 함량이 높고, 즉 효소활성도가 높다.

4. 실험 기구, 재료 :
․시료 : Trypsin, Bromelin
․시약 : 0.6% casein 용액, 0.1M 인산염완충용액(pH 6.0), 0.1N-NaOH 용액,
0.1N-용액, 0.44M trichloroacetic acid 용액, 0.55M-
․장치 및 기구 : 비커, 항온수조, 분광광도계

5. 실험방법:
(1) 효소액의 조제(1% 효소액)
① 0.1g 효소를 1ml 증류수에 녹인다.
② 여기에 0.1M 인산염완충용액 ( pH 6.0 )을 8.9ml 취하여 용해시킨다.

(2) 활성도 측정
① 효소액 1ml를 시험관에 취하고, 미리 50℃ 예열시킨 0.6% casein용액 5ml를 가하여 잘 흔든후 10분간(50℃)항온수조 내에서 반응시킨다.
② 곧 0.44M trichloroacetic acid(TCA 용액) 5ml를 넣어서 흔들어 반응을 중지시킨다.
③ 다시(30℃)항온수조 내에 약 30분간 방치한다.
④ 침전의 생성이 완료되면 시험관 우에 소형 깔대기를 씌우고 여과지를 사용하여 여과한다.

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