protease의 활성도 측정

소개글

protease의 활성도 측정 기능성 실험 보고서입니다.
사진, 참고문헌 기재

목차

1. 실험제목

2. 실험원리

3. 실험재료및기구

4. 실험결과및고찰

5. 참고문헌

본문내용

실 험 제 목
protease의 활성도 측정
실 험 원 리
Protease를 적당한 농도의 casein 용액에 작용시킨다. 단백질 제거제인 trichloroacetic acid를 가하여 미분해의 단백질을 침전시켜 제거한 용액에 Folin 시약을 가하면 생성된 tyrosine에 의하여 반응액이 청색으로 착색된다. 이것을 분광광도계에 의하여 비색정량하는 방법이다. O.D값이 높을수록 단백질이 분해되어 생성된 tyrosine의 함량이 높고, 즉 효소활성도가 높다.
실 험 재 료
및 기 구
· 시료 : neutrase(Novo Nordisk, neutrase 0.5L)
flavourzyme(Novo Nordisk, flavourzyme 500MG)
· 시약 : 0.6% casein 용액, 0.1M 인산염완충용액(pH 6.0, 6.8),
0.1N-NaOH 용액, 0.1N-H3PO4용액, 0.44M trichloroacetic acid 용 액, 0.55M-Na2CO3
▶ Folin 시약의 제조 방법
① 약 2L 들이의 밑이 둥근 플라스크에 약 700ml의 증류수를 넣고, 텅스텐 산나트륨(sodium tungstate) 100g과 몰리브덴산나트(sodium molybdate) 25g을 용해시켜서 85% 인산 50ml와 진한 HCl 100ml를 가한다.
② 플라스크에 은박으로 싼 코르크마개 또는 고무마개에 환류냉각기를 장치 하여 끓인다.
③ 1-2시간 만에 진한 녹색이 되나 10시간 동안 끓인다.
④ 가열이 끝난 후에는 투명한 액이 되며 이 액에 황산리튬(lithiumsulfate) 150g과 증류수 약 50ml를 가하고 탈색을 위한 액체브롬 1-2방울을 넣어 서 냉각기를 장치에서 뗀 후에 다시 끓인다.
⑤ 액이 완전히 황색으로 되지 않을 때에는 브롬(bromine)을 다시 추가한다.
⑥ 탈색 후 과잉의 브롬을 제거하기 위하여 15분간 조용히 끓인다.

참고 자료

- 최신 식품화학. 한명규. 형설출판사. 2002.
- 현대 식품화학. 강인수, 김정숙, 성태수, 조득문, 조효현. 지구문화사.
1995.
- 최신 식품화학. 홍윤호. 효일문화사.