PCR 실험보고서

소개글

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목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3. 실험 기구 및 재료
4. 실험방법
5. 실험과정
6. 실험 결과
7. 실험 고찰
8. 참고문헌

본문내용

실험목적
그람염색 결과 그람음성균이고 장내세균을 동정하는데 사용되는 API 20E kit를 사용했을 때 나온 결과인 Edwardsiella piscicida 균주가 정확한지 PCR을 통해 확인한다.

실험원리
PCR은 Polymerase Chain Reaction으로 타겟 DNA의 특정 부분을 대량으로 복제, 증폭시키는 기술이다. 크게 Denaturation, Annerling, Extension 단계로 이루어진다. Denaturation은 DNA 변성 과정으로 이중 나선 구조로 되어있는 DNA를 고온으로 가열하여 단열가닥으로 분리하는 과정이다. Taq polymerase가 높은 온도에서 변성이 되어 이중 나선 구조가 분리된다. 다만 온도를 너무 높이거나 처리 시간을 지나치게 늘리면 내열성 DNA polymerase 활성을 잃게 되므로 주의해야한다. Annerling은 Forward primer와 Reverse primer가 상보적인 주형 DNA의 단일가닥에 결합하는 과정이다. Extension은 DNA polymerase를 작용시켜 primer를 신장시키는 과정이다.
PCR 시약에는 10X PCR Buffer, dNTP, Primer, Taq DNA Polimerase, Template DNA가 있다. 10X PCR Buffer은 PCR 반응을 위한 완충용액으로 효소 최적 활성에 필요한 환경을 제공한다. dNTP는 dATP, dCTP, dTTP, dGTP로 합성에 재료가 되는 Nucleotide이다. Primer는 Forward primer와 Reverse primer가 있으며 증폭할 영역에 상보적으로 결합하는 짧은 유전자 서열이다. Taq DNA Polimerase은 유전자 합성 효소, primer와 DNA가 결합한 곳에서부터 DNA를 합성하는 역할을 한다. 또한 Denaturation 단계에서 고온으로 가열할 때 안정적으로 반응할 수 있도록 한다. Template DNA는 증폭하려는 DNA 주형 가닥을 말한다.
전기영동은 주로 생체 고분자들의 성질을 연구하고, 그것들을 분석, 분리, 정제하는 중요한 방법중 하나이다. DNA, RNA가 고유의 전하를 띠고 있고, 그것들이 어떤 전기장에 놓이게 되면 이동할 수 있다는 사실을 이용한다.

참고 자료

(주)다인바이오 연구소 「실험자료실 PCR (Polymerase Chain Reaction) 기본원리」
http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=3&sfl=wr_subject&stx=PCR&sop=and
㈜한국과학 「전기영동의 원리와 실험」
http://local.koreasci.com/download/manual/Edvotek/ED101.pdf