RNA prep, real time PCR 예비실험보고서

소개글

실험과정, 결과및 고찰이 포함되지 않은 예비보고서입니다. 참고문헌은 각주에 포함되어 있습니다.

목차

1. 실험제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목적
4. 실험 원리

본문내용

1. 실험제목 : RNA prep / real time PCR
2. 실험날짜 :
3. 실험목적 :
Real time PCR을 통해 실시간으로 DNA 증폭을 정량하고 전통적 PCR 과의 차이점을 알아본다.
4. 실험원리
시약을 이용한 RNA prep / real time PCR (개념 / 일반적인 PCR과 차이점 3가지)
RNA prep
RNA는 single strand 구조로 세포 내 RNase 및 다양한 외부자극에 의해 분해되거나 원형보존이 어렵다. 현재까지 개발된 방법들은 상대적으로 저렴한 수동방법(manual method)부터 kit를 사용해 분리하는 다양한 방법이 있다.
RNA 분리의 공통적인 원리 및 순서는 다음과 같다.
Harvesting cell (tissue) > lysis > RNA separation from other cellular molecules > solubilization of RNA > RNA elution > storage

Phenol based organic extraction
샘플이 lysis되는 과정에서 phenol과 guanidine isothiocyanate가 세포를 파괴하고 세포 내부에 있는 물질들을 세포 밖으로 내보내는데, 이 때 RNase에 의한 핵산의 분해 등을 막아 핵산을 온전하게 추출할 수 있다. 이후 chloroform을 추가하여 원심분리 시 수용층과 유기용매 층으로 나뉜다. RNA는 수용층에 위치하여 이 수용층에는 guanidine isothiocyanate가 포함되어 있어 RNase에 의한 분해를 억제한다. 단백질은 유기용매층, DNA는 수용층과 유기용매층의 중간에 위치하게 된다. 수용층에 녹아 있는 RNA는 isopropyl alcohol을 이용하여 침전시키고 ethanol로 RNA와 결합된 염을 씻어내 RNA만을 정제해 낼 수 있다.
Phenol : 물은 매우 극성 용매이며 산소원자는 전기음성도가 커 전자를 수소에서 멀어지게 하여 산소 원자에 약간의 음전하를, 수소 원자에 약간의 양전하를 생성한다. 즉 전하가 분자 내에서 분극 되도록 한다. 반면에 phenol은 물보다 극성이 작다.

참고 자료

없음