효소반응속도론 결과레포트

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목차

1. 이론적 배경

2. 실험 방법
1) 효소 반응속도론
2) 효소 고정화

3. 실험 결과
1) Free enzyme과 Immobilized enzyme의 흡광도, 시간 그래프
2) Lineweaver-Burk Plot
3) Michaelis-Menten Kinetics
4) Free enzyme과 Immobilized enzyme의 Km, Vm, Kcat, Kcat/Km 값

4. 실험 결과에 대한 분석 및 고찰
1) Free enzyme과 Immobilize enzyme의 parameter 비교
2) Michaelis-Menten plot과 Lineweaver-Burk plot으로 구한 Vmax값 비교
3) 효소 고정화 종류, 방법, 장점
4) 고정화 효소의 응용

5. 결론

6. Reference

본문내용

1. 이론적 배경
효소는 미생물에서부터 동물에 이르기까지 모든 생물에 반드시 존재하는 생체물질이자 촉매 이다. 화학반응을 촉매할 수 있는 고분자 단백질로, 다양한 종류가 존재하며 매우 특이적이고 효과적인 생촉매이다. 기질과 결합하여 Enzyme-Substrate Complex를 형성함으로써 반응의 Activation Energy를 낮추는 촉매 역할을 한다.
Lipase는 Triacylclycerol을 지방산과 monoacylglycerol로 분해할 수 있는 효소이다. 일부 효소의 경우, 유색 생성물을 형성하는 기질 유사체를 이용해 효소반응속도론 측면에서 다양한 효소 특성들을 쉽게 확인할 수 있다. Lipase의 경우, p-nitrophenyl butyrate라는 기질 유사 체가 활용될 수 있으며, 이를 분해해 생성하는 물질 중 하나는 p-nitrophenolate ion으로 흡 광해 노란색을 띤다. 흡광도를 측정해 p-nitrophenolate ion을 정량할 수 있다.
반응생성물의 증가량을 시간의 함수로 추적하여 반응속도를 알 수 있다. 효소, Eo를 일정하 다고 놓고, Vo와 기질의 농도 [S]에 대한 상관관계를 구하면, 촉매작용의 속도는 기질 농도가 증가함에 따라 정비례하다가 평평해지고, 기질의 농도가 더 높아지면 최대값에 접근하는 평형 상태에 도달한다. 이는 Michaelis-Menten 식으로 잘 설명된다.
하지만 Michaelis-Meten 곡선에서, Vmax는 근접할 수는 있어도 결코 도달할 수는 없다. KM 도 마찬가지로 Vmax/2일 때 기질의 농도이기 때문에 정확한 값을 결정할 수 없다. 따라서 이 를 정확하게 결정하기 위해 Michaelis-Menten 방정식 양변에 역수를 취한 Lineweaver-Burk equation 또는 이중-역수 도표라고 불리는 방정식을 사용한다.
고정화된 효소의 활성을 측정하기 위해, 용액상에 고정화된 효소의 양만큼 순수한 효소를 용 해시켜 효소의 활성을 측정할 수 있다.

참고 자료

화공생명공학실험2 매뉴얼
https://www.cheric.org/files/education/cyberlecture/d200202/d200202-401.pdf
http://contents.kocw.or.kr/document/wcu/2010/11/02/04/11_02_04_byunggee_10.pdf
김효정(2007). 고정화 효소를 이용한 PFR과 CSTR에서의 hexyglucoside의 합성에 관한 연구
http://elearning.kocw.net/document/wcu/2010/11/02/04/11_02_04_byunggee_08.pdf
https://ko.wikipedia.org/wiki/%ED%9A%A8%EC%86%8C#%EA%B0%80%EC%97%AD%EC%A0%81_%EC%A0%80%ED%95%B4