생명과학실험 SDS PAGE

소개글

"생명과학실험 SDS PAGE"에 대한 내용입니다.

목차

1. 개요 (Introduction)
1) SDS의 역할 및 원리와 실험 목적
2) Gel에 들어가는 시료의 역할
3) Resolving gel과 Stacking gel의 차이
4) Coomassie Blue

2. 실험 재료 및 실험 방법(Materials&Method)
1) 실험 재료 및 도구
2) 실험 방법

3. 실험 결과 (Result)
1) 결과 관찰 및 분석

4. Discussion
1) 정제 전보다 정제 후 의 순도(전체 단백질 밴드 중 band의 intensity 비율)는 높아졌는가? 그렇다면, 어떤 용액에서 가장 높아졌는가? 만약 정제 후 순도가 높아지지 않았다면 무엇이 문제일 수 있는가?
2) 정제하고자 하는 단백질 외의 band가 존재하는 이유는?
3) Flow through에 Naa30 band가 존재한다면, 그 이유는?

본문내용

SDS의 역할 및 원리와 실험 목적
SDS-PAGE는 Sodium Dodceyl Sulfate – PolyAcrylamide Gel Electrophoresis의 약자로, 혼합 단백질 용액으로부터 특정 단백질을 분리할 때 사용되는 전기영동법이다. 단백질의 소수성 및 전기적 성질 등을 배재하고 크기에 따라서 분리 할 수 있다. SDS와 환원제를 처리해 가열하면 단백질이 아미노산 2개당 하나의 (-)로 masking 되고 이황화 결합이 끊어져, 변성된 선형 단백질이 만들어진다. 이를 다공성 겔상에서 전기영동해 size별로 분리해 획득한다. 이번 실험에서 SDS를 수행하는 이유는 다음과 같다. 1주차에 진행한 친화성 크로마토그래피를 통해 특정 단백질 Naa30(size 40kDa)을 정제했다. 그 후 SDS-PAGE를 통해 각 tube에 들어있는 단백질들을 크기별로 전기 영동하여 겔 상의 Naa30 band를 찾아 정말 잘 정제가 된 것인지 확인하는 것이 이 실험의 목적이다.

Gel에 들어가는 시료의 역할
gel은 Acryamide-bisphosphate, Tris-HCl, SDS, APS, TEMED를 포함한다.
Acryamide-bisphosphat(A/B)
: gel의 pore을 형성하는 주 재료이다. 분리하고자하는 시료의 크게 따라 농도를 조절한다. acrylamid와 bisacrylamide의 라디칼 반응, 연쇄 반응을 통해 cross-link되며 겔 상에 pore를 형성한다.
Tris-HCl
: Stacking gel과 Resolving gel의 pH를 다르게 하여 각 gel에서 Gly의 charge 다르게 조정해주고, 또한 Cl-를 첨가해주는 효과도 있다.
SDS
: 강력한 음이온성 detergent로 단백질의 2개 아미노산마다 하나씩 결합해 단백질을 강력하게 변성시키며 (비공유 결합 저해), 모든 단백질에 (-) masking을 걸어..

<중 략>

참고 자료

2021.04.03.검색일 https://bio-chae.com/western-blot/
Molecular Biology of The Cell, Bruce Alberts et al., Sixth Edition, Garland Science