t4 dna ligase 실험보고서

소개글

재조합 DNA 를 이용하여 T4 DNA ligase를 생성하는 실험 보고서입니다.

목차

1. abstract
2. introduction (T4 DNA ligase, plasmid 등 개념)
3. materials and method (mini prep, PCR, 전기영동, IPTG induction , Bradford assay등 포함)
4. results (plasmid prep, 단백질 induction, 효소 반응 실험 포함)
5. discussion

본문내용

ABSTRACT
T4 DNA ligase는 bacteriophage T4에서 발현된다. cohesive 또는 blunt termini를 가지는 double strand DNA를 연결한다. Mg2+를 cofactor로 이용하며 ATP의 가수분해를 통해 5‘-phosphate와 3'-hydroxyl terminus 사이에 phosphodiester bond를 형성한다. Nucleotide의 손실없이 nick이 생긴 DNA에서 끊어진 부분을 다시 이을 수도 있기 때문에 DNA repair의 기능도 담당한다.

<중 략>

INTRODUCTION
DNA ligase는 1967년부터 다양한 원핵생물과 진핵생물에서 발견되었다. Bacteriphage T4에서 발현되는 T4 DNA ligase는 E.coli DNA ligase와 더불어서 가장 많이 조사된 ligase중 하나이다. T4 DNA ligase는 그림 1과 같이 Mg2+를 cofactor로 이용하며 ATP의 가수분해를 통해 5‘-phosphate와 3'-hydroxyl terminus 사이에 phosphodiester bond를 형성한다.
Nucleotide의 손실 없이 nick이 생긴 DNA에서 끊어진 부분을 다시 이을 수도 있기 때문에 DNA repair의 기능도 담당한다. T4 DNA ligase는 DNA double helix 뿐만 아니라 RNA-DNA hybrid duplex, cohesive 또는 blunt-end terminal을 join할 수 있다.(1, 2)
본 실험은 크게 세 단계로 구분 될 수 있다.
vector와 insert에서 recombinant DNA를 준비하는 과정, transformation된 cell에서 IPTG induction으로 protein을 생성하는 과정, 그리고 protein을 정제하고 activity test를 통해서 이용 가능한 enzyme을 생성했는지 확인하는 과정이다.

참고 자료

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