BL21과 DH5a 차이에 대한 사전보고서
- 최초 등록일
- 2020.07.08
- 최종 저작일
- 2019.04
- 6페이지/
한컴오피스
- 가격 4,000원
소개글
"BL21과 DH5a 차이에 대한 사전보고서"에 대한 내용입니다.
목차
없음
본문내용
BL21/DH5a 차이
K12에서 기원한 DH5a, B strain에서 기원한 BL21
각 strain의 강점을 살려 하나는 plasmid 정제용 / 하나는 단백질 발현용으로 특화하여 사용하고 있다.
*cell line
1. BL21: 성장속도가 좀더 빠르며, ompT와 같은 protease가 결손된 strain이므로 단백질 발현에 많이 사용. (물론 발현객체가 무엇이냐에 따라 DH5a도 좋은 발현숙주로 사용될 수 있다) RecA+, pET vector(T7 promoter) 계열의 발현. pET vector: Phage T7 promoter를 갖고 있기 때문에 T7 RNA polymerase가 있어야만 발현이 가능.
→ T7 RNA polymerase 유전자가 lac promoter에 의해 발현되는 BL21 계통의 host를 사용해야 한다.
2. DH5a: BL21과 비교하였을때 비교적 발현이 약한편이다.
RecA-, pGEX vector(pTac promoter) 계열의 발현. pGEX vector: Ptac(Trp + lac promoter fusion type) promoter를 갖고 IPTG로 induction. Ptac-GST-thrombin-단백질-His로 구성.
DH5 알파는 recA 돌연변이를 가지므로 이종 재조합이 없어서 높은 삽입 안정성을 보장합니다. 또한,이 과정에는 플라스미드를 소화시킬 수있는 엔도 뉴 클레아 제가 부족하다. DH5 알파는 추가로 청백색 스크리닝에 적합하다.
반대쪽의 BL21은 단백질 발현 목적으로 제작되었는데 일부 프로테아제에는 결핍되어 있기 때문에 재조합 단백질을 소화하지 않으며 흔히 사용되는 T7 RNA 폴리머라제는 IPTG에 의한 유도시 게놈 카피 (DE3 리소 겐을 통해 도입 됨)로부터 BL21 (DE3) 균주로 발현된다.
DH5 알파는 recA 돌연변이를 가지므로 이종 재조합이 없어서 높은 삽입 안정성을 보장합니다. 또한, 이 과정에는 플라스미드를 소화시킬 수있는 엔도 뉴 클레아 제가 부족합니다.
참고 자료
https://en.m.wikipedia.org/wiki/T7_RNA_polymerase
3학년 1학기 유전공학 프로토콜
