Plasmid DNA Purification 결과보고서

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"Plasmid DNA Purification 결과보고서"에 대한 내용입니다.

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Ⅰ. 실험방법
1. Preparation
① Cell – cell pellet 사용
② miniprep. kit – 조별로 필요한 만큼 e-tube(1.5mL test tube)에 덜어서 사용
A1 용액 (Resuspension Solution) : 냉장고 보관 (조당 150μL)
A2 용액 (Lysis Solution) : 상온 보관, 조당 250μL, 항온조를 이용해 SDS 완전히 녹인 후 사용 (조당250μL)
A3 용액 (Neutralization Solution) : 상온 보관 (조당 350μL)
AQ 용액 (Wash Solution) : 상온 보관 (조당 450μL)
AE 용액 (Elution Buffer ) : 상온 보관 (조당 50μL)
DNA spin column과 collection tube 각 1개씩 조별로 준비

<중 략>

Ⅲ. 토의
주로 miniprep이라고 부르는 이번 실험은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법으로 가장 보편적으로 Alkali lysis method를 이용한다.

기본적 원리는 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것인데, 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 세포내에 chromosomal DNA는 일반적으로 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 큰 반면 plasmid는 supercoiled 형태를 가짐으로써 pH의 변화에 따라서도 plasmid의 형태와 구조가 크게 변하지 않기 때문에 이러한 차이를 이용해 분리된다.

참고 자료

없음

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