[생물 실험 레포트] 항생제 감수성 평가

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본문내용

Title : paper disc Methods

Purpose : 항생제를 이용한 생장억제 실험을 통해 clean zone을 관찰한다.

Materials : 여러 종류의 항생제(Ampicillin, Kanamycin) paper disc, 은박지, 세균, 일회용 삼각봉, LB배지, pipette, tip, autoclave, 핀셋, 자

Methods :
[항생제 disc 만들기]
① paper disc를 은박지로 싸서 autoclave 멸균한다.
② 은박지를 깔고 그 위에 필요한 양만큼의 멸균한 disc를 멸균한 핀셋으로 집어서 올려놓는다.
③ disc에 촉촉이 젖을 정도로 (보통 20ul) 항생제를 loading 한다.
④ 건조시킨다. (보통 10~20분)

[균의 도말]
①실험 전에 사용할 균을 LB broth에 접종한 후 37℃에서 24시간 키워activation시킨다.
②activation 시킨 균을 200~300ul를 배지(labelled)에 접종한다. (LB agar plate : 실험 전에 물기 제거를 위하여 37℃ incubator에서 2~3시간 정도 둔다)
③70% EtOH와 알코올램프로 삼각봉을 멸균한다.
④충분히 식힌 후 접종한 균을 골고루 도말한다.

[Disc 심기]
①멸균된 핀셋으로 아무것도 처리하지 않은 disc(control)와 항생제가 loading 된 disc를 집어 균이 도말된 plate 위에 살포시 올려놓는다.
②Disc를 심은 후 빠른 시간 내에 37℃ incubator에서 배양한다.
③24~48시간 배양 후, 자를 이용하여 clear zone (zone of inhibition)의 지름을 측정한다.

[주의사항] -각 항생제 disc는 배지 가장자리에서 1.5cm정도 떨어지게 한 후 정해진 장소에 올려놓는다.
-paper를 심기 전에 배지의 뒷면에 어떤 위치에 어떠한 항생제 disc를 심을 것인지 표시해준다.
-Disc 간 간격은 2.4cm 이상 되게 하는 것이 좋다.

참고 자료

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