Preparation of Enzymes(SDS-PAGE)

목차

1. Introduction

2. Purpose

3. Materials

4. Materials

5. Procedures(Gel 준비)

6. Procedures(Electrophoresis)

7. Results

8. Discussion
1) translation rate를 조절하는 mechanism에는 어떤 것이 있나?
2) 단백질을 효율적으로 분리하려면 어떻게 해야 하는가? 어떻게 하면 단백질량을 늘릴 수 있는가?

9. Reference

본문내용

SDS(Sodium Dodecyl Sulfate, CH₃(CH₂)₁₁OSO₃Na)는 비극성의 탄소 사슬 부분과 극성의 머리 부분이 있는 음이온성 계면활성제로 단백질의 변성을 유발한다. SDS는 단백질의 비공유결합을 대부분 끊어주어 단백질을 분리할 때 단백질의 3차 구조의 영향을 받지 않도록 한다. 또 단백질에 SDS를 넣고 가열해주면 SDS 1분자가 아미노산 2분자와 결합하면서 단백질의 total charge가 음전하를 띠게 되는데 이로 인해 단백질을 분리할 때 단백질의 전하를 고려할 필요가 없어진다. Mercaptoethanol은 disulfide bond를 끊어 선형의 polypeptide를 만드는 데 도움을 준다.
PAGE(Poly Acrylamide Gel Electrophoresis)는 acrylamide의 중합반응으로 만들어진 gel을 이용하여 전기영동을 하는 방법이다. 전기영동이란 DNA나 RNA, 단백질과 같은 큰 분자들을 전기적인 힘을 이용하여 크기에 따라 분리하는 기술로, 겔에 홈을 만들어 DNA나 RNA, 단백질 등의 분자를 집어넣고 전류를 흘려주면 음전하를 띤 분자들이 전기적인 힘에 의해 겔 안에서 이동하게 된다. 같은 크기를 가진 분자들은 하나의 집단을 형성하여 움직이기 때문에 전기영동을 한 후에 겔을 염색하면 이것이 하나의 띠 모양으로 나타난다. 작은 분자는 큰 분자에 비해 빠른 속도로 이동하기 때문에 서로 다른 크기의 분자들이 겔 상에서 서로 다른 위치에 존재하게 된다. 각각의 띠를 이루고 있는 분자들의 크기는 이미 크기를 알고 있는 분자(marker)를 같이 전기영동 하여 gel 상에 나타난 띠의 상대적인 위치를 비교함으로써 그 크기를 측정할 수 있다.
Glycine은 음전하와 양전하를 동시에 띨 수 있다. pH 조건에 따라 glycine의 전하가 바뀌는데 이 때문에 running buffer(전기영동 완충용액)에 glycine을 첨가하면 gel 내의 pH 조건에 따라 전기영동 속도를 조절할 수 있다.

참고 자료

John Garbutt, 『Essentials of Food Microbiology』, Arnold Publishers
정동효, 『식품공학』, 유한문화사