[분자유전학실험] DNA sequencing

목차

1. Purpose
2. material
3. introduction
4. Method
5. Result
6. Discussion
7. Reference

본문내용

3. Purpose : DNA 정제 원리와 필요성, DNA 염기서열 분석 방법과 이용에 대해 알아본다.
1) PCR로 증폭한 DNA 산물을 정제하여 DNA 염기서열분석이 가능한 순도 높은 DNA 시료를
제조한다.
2) DNA 염기 서열의 분석 원리를 공부한다. 실제 분석은 외부 기관에 의뢰
3) 얻어진 분석 결과의 활용에 대해 알아보자. (Bioinformatics)

4. Materials : PCR products, PCR purification kit, microcentrifuge, new microcentrifuge tube

5. Introduction :
DNA의 sequencing은 1977년에 이르러 거의 동시에 개발 된 두 가지 방법에 의해 가능하게 되었다. 그 두 가지 방법은 F. Sanger와 A.R. coulson이 개발한 chain termination 방법과 A. Maxam과 W. Gilbert의 chemical degradation 방법이다. Maxam과 Gilbert가 개발한 화학반응을 이용한 방법(1977,1980)은 화학제를 이용하여 DNA 내의 특정 염기부위를 절단하여 그 조각을 분석하는 방법이고, Sanger가 개발한 효소반응을 이용한 방법(1982)은 dideoxyribonucleotides를 이용하여 분석하는 방법이다. 현재는 여러 가지 장점으로 chain termination 방법을 선호하게 되었다.
Sanger의 방법은 dideoxy chain termination 방법, 효소를 이용한 방법 등으로 불리우며, DNA polymerase I(혹은 T7 DNA polymerase, Taq DNA polymerase)과 동위원소로 표지 된 nucleotide([α-35S]dATP, [α-32P]dATP)와 나머지 세 종류의 표식이 안된 nucleotide가 들어있는 반응액을 4가지 2',3'-dideoxyribonucleotide가 각각 한 종류씩 들어있는 tube에 옮겨 반응시킨다.

참고 자료

http://biopedia.org/index.php/%EC%8B%9C%ED%80%80%EC%8B%B1_(sequencing)
http://bric.postech.ac.kr/myboard/view.php?Board=scicafe000352&filename=Plasmid%20DNA%C0%C7%20%BA%D0%B8%AE%20%B9%D7%20%C1%A4%C1%A6%B9%E6%B9%FD.hwp&id=40&fidx=1
http://kbiotec.kijeon.ac.kr/pro_master/book_2_4.asp
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/DNA_sequencing.php
http://mujige.com/815
http://www.google.co.kr/url?sa=t&source=web&cd=8&sqi=2&ved=0CGYQFjAH&url=http%3A%2F%2Fwww.skkbio.com%2FAttachedFile%2FCafePDS%2F15%2F15_PDS_1_6_DNAsequencing.doc&rct=j&q=ddNTP%20dntp&ei=ZF3hTIvpBZHEsAP80PCgCg&usg=AFQjCNHkKUq0yV9zKayxmq314XA69lDkeQ&cad=rja
http://www.genehunters.co.kr/Training/01_3_4.htm
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_22.php
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/DNA_sequencing.php