[생화학실험]DNS 법을 이용한 환원당 정량분석

소개글

환원당(reducing sugar)을 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid)와 Rochelle 염으로 발색하여 흡광도를 측정하는 당 정량법을 실험해 보는 레포트입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 시약 및 기구
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 자료
8. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
(1) 화학물의 흡광도를 측정하여 정량 분석하는 것이다. 흡광도는 전자 전이에 따른 흡수물질의 농도에 따라 다르게 나타나기 때문에, 흡광도를 통해 정량분석을 할 수 있다. 미지시료의 흡광도와 표준용액의 흡광도를 비교하여 알 수 있다.
(5) 환원당(reducing sugar)을 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid)와 Rochelle 염으로 발색하여 흡광도를 측정하는 당 정량법을 실험해 보자. 이 방법은 조작이 간편하면서도 저렴하게 원하는 결과를 얻을 수 있어 널리 사용되고 있다.
(2) 환원당(reducing sugar)의 성질을 이용하여 시료 중 환원당의 농도를 정량한다.
(3) DNS법의 원리는 환원당과 3,5-dinitrosalicylic acid가 반응하여 환원되어 생성된 3-amino-5 -nitrosalicylic acid의 흡광도를 측정하여 당을 정량한다. 당의 환원력은 당의 종류에 따라 차이가 있고 반응 조건에 따라 다르므로 상대적인 양의 함량만을 측정할 수 있다. 이 반응은 알칼리성에서 잘 일어나며 발색되기에 비 특이적이므로 모든 reducing compound와 반응한다.

<중 략>

첫째로, 증류수100㎖ + 디니트로살리실산0.75g + NaOH1.4g + Rochelle염 21.61g + 페놀 0.54㎖ + 0.59g로 DNS시약 제조를 할 수 있다. 두 번째는, 표준 당 용액을 제조하는데 책에 의하면 용액 1㎖당 0.2∼1.0㎎ 의 환원당을 함유하도록 시료를 제조한다고 하였으나 환원당이 너무 작으면 검출되지 않으므로 용액 70㎖에 글루코오스 30g을 넣고 제조한다. 세 번째는, DNS 3㎖에 표준당용액 1㎖을 넣어 끓는 물중탕에서 5분간 방치 한 후 상온으로 냉각시킨다. 이때 DNS는 NaOH로 중화적정하게 되는데 시 료를 제조할 때 HCl이 함유되었기 때문에 산성이므로 NaOH로 중화적정하 게 되고 0.1N농도의 HCl의 양은 10.43g이 된다.여기서 노르말농도에 대해 생각해 보면 용액 1L당 물질의 당량수로 HCl의 0.1N는 Assay가 35%이고 당량 수는 1이므로 으로 나타낼 수 있다.

참고 자료

생화학, LARRY G.SCHEVE, 유한문화사, 2007, p.157
대학 분석 화학, 이흥락, 학문사, 2006, p.431∼432
염료화학, 김공주 외, 대광서림, 2007, p.42∼43
생화학 요론, 김창한 강국희, 유한문화사, p.26
Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar, Anal, Chem. MILLER .G.L, 1959, p.31
기초생화학,이종순,대학서림, 2006, p77∼85
생화학 및 분자 세포생물학, Koolman, Jan, 월드사이언스, 2008, p160
생화학 Mary K. Campbell 라이프사이언스, 2007, p187∼194
분석화학, 기기분석, 2000
기기분석의 기초와 실험, 1997, 반도출판사
생물 유기화학 실험, 2001, 도서출판 미학사
최신 기기분석, 동화기술, 2004
기기분석화학, 탐구당, 1997
기기분석의 원리, 백유 아카데미, 2000
생화학, 김명순, 개정3판 형설출판사, 2008, p32∼36
표준 식품 분석학(이론 및 실험), 채수규 외 5인