Immunocytochemistry

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Immunocytochemistry

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Result
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Result

- 형광 푸른색을 내는 DAPI는 핵을 염색시켜 곳곳에 편재해 있는 푸른색의 염색체를 관찰할 수 있었다. 현미경의 배율이 그리 높지 않아 염색체의 자세한 모양까지 살펴 볼 순 없었고 단지 염색체가 존재한다는 사실만 확인할 수 있었다. 그 다음 붉은 색으로 염색된
β-actin은 예상대로라면 핵 주위에 실처럼 존재할 것이라고 생각되었지만, 절차 상의 문제가 있었는지 제대로 염색되지 않아 한 개 정도의 붉고 기다란 물질만 관찰되었다.

- 3% BSA의 역할
BLOCKING. primary antibody가 첨가되기 전 넣어주는 물질로 비특이적인 다른 antibody들과 결합하는 것을 막아준다. 실험을 제대로 진행하기 위해선 세포에 특이적인 primary antibody가 결합해야 하는데 antibody는 다른 antigen과 비특이적 결합을 할 가능성도 있다. 그렇기 때문에 antigen과 antibody의 특이적 반응을 높이기 위해서 BSA가 첨가된다.

- 0.5% PBST의 역할
BSA와 같이 antibody의 결합 효율을 높이기 위해 첨가하지만 작용하는 기전은 다르다. PBST의 경우 첨가된 triton이 세포막을 깨어 antibody가 잘 붙게 도와준다.

Discussion

- 확실한 결과를 위한 다른 실험 설계
먼저 incubation 시간을 늘린다. 이 것은 antibody들이 antigen들과 결합 할 수 있는 시간을 늘려주는 것으로, 따라서 더 많은 antibody들이 antigen을 찾아 결합 비율을 높아져 더 많은 세포가 관찰될 것으로 생각된다.

참고 자료

1) Bullock & Petrusz, Techniques in immunocytochemisty vol.4, Academic press, 1989, p.225
2) Bullock & Petrusz, Techniques in immunocytochemisty vol.3, Academic press, 1989, p.46
3) Tamiya S., Immunohistochemistry and in situ hybridizattion method and athological significance, Kyushu University, 2006, p.93