GFP 정제

소개글

GFP 정제에 관한 실험보고서(예비, 결과 합본)

목차

Abstract.
Introduction.
Material & Method
Result
Discussion
Reference

본문내용

Abstract
이번 실험은 E.coli의 cell로부터 Affinity chromatography의 방법으로 GFP를 정제하고 SDS-PAGE, Lowry assay, spectrofluoremeter를 통해 그 결과를 알아보는 실험이었다. GFP단백질을 용질분자와 지지체 위에 결합되어 있는 리간드(ligand) 사이의 특이한 화학적 상호작용에 기초한 Affinity chromatography을 이용하여 분리하고 전기영동에 기초한 SDS-PAGE로 GFP를 분리했지만 GFP를 처리해주지 않아 직접적인 비교가 힘든 결과를 얻게 되었다, phosphomolybdotungstate가 구리에 의한 aromatic amino acid의 산화에 의해 heteropolybdenum blue로 환원되는 반응에 의해 진환 푸른색을 발색하는 성질을 이용하여단백질의 농도를 정량하는 Lowry assay를 통해 단백질을 정량하여 단백질의 농도 923ug/ml를 알 수 있었다. 또한 spectrofluoremeter를 통해 GFP가 흡수하고 반사하는 파장을 조사하여 GFP가 520nm의 파장을 반사하여 녹색 빛을 띰을 알 수 있었다.

Introduction
현대 바이오 기술의 기본적인 도구중의 하나는 DNA splicing, DNA cutting, 그리고 그렇게 자른 DNA를 다른 DNA 분자와 연결하는 기술이다. 예를 들자면 인슐린 호르몬을 생산하는 데 관여하는 건강한 사람의 gene을 박테리아에 옮겨서 생산하게 하는 등의 일이 그것이다. 이런 유전적으로 조작된 인슐린은 정제가 되어 당뇨병을 앓고 있는 환자에게 사용되게 된다. 그런데 이런 유전적으로 조작된 단백질을 박테리아에서 정제하는 데에는 박테리아가 원래 가지고 있는 단백질에 의한 오염이라는 한 가지 공통적인 문제점이 존재한다. 그렇다면 단백질은 어떻게 정제되는가? 단백질의 분리는 다른 단백질과 구별되는 그 단백질의 특징을 이용한다. 크로마토그래피는 생명공학 산업에서 박테리아 단백질들로부터 원하는 단백질을 분리, 정제하는 용도에 있어 유용한 도구가 되어 왔다.
단백질 분리를 위하여 가장 좋은 방법은 Column chromato

참고 자료

David Freifelder, 분자 생물학, 아카데미서적, 1995, pp235~241
한국분자생물학회, 분자 생물학, 아카데미서적, 1997, pp198~204