생화학 실험 2 후반부 : 1주차레포트 : Protein Overexpression in E.coli and Purification by Affinity Chromatography

소개글

연세대학교 생화학 실험 2 후반부 1주차 실험에 대한 리포트입니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자:
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재:
7. 방법:
8. 결과:
9. 고찰
10. 참고문헌
11. 숙제(Further study):

본문내용

(1) 우리가 사용할 E.coli에 관한 이야기...
우리가 E.coli를 이용하는 이유는 이 실험을 진행하는데 있어서 E.coli가 장점을 가지고 있기 때문이다. E.coli는 우선 매우 저렴한 비용으로 실험을 진행할 수 있도록 해주고 우리가 원하는 protein overexpression이 잘 일어난다는 장점을 지니고 있다. 하지만 단점도 가지는데 E.coli에서 발현되는 protein의 경우 protein glycosylation이나 cleavage 등과 post-translational modification이 이루어지지 않기 때문에 post-translational modification 과정이 반드시 필요한 protein의 경우 이 실험방법으로 정제해낸다고 하더라도 활성을 나타내기는 어렵다.

(2) protein Overexpression에 관한 이야기...
우리의 protein을 overexpression 시키기 위해서는 특별한 작업이 수반되어야만 한다. 먼저 우리가 이전 실험 과정들에서 공부했었던 lac operon이 이용되는데... E.coli에 들어있는 chromosomal DNA를 lac promoter와 T7 RNA polymerase gene 등을 갖도록 recombination시킨다. 그리고 E.coli에 T7 late promoter gene과 target gene 등을 갖는 plasmid를 삽입해준다. 우리는 IPTG의 공급 여부를 통해서 lac promoter를

참고 자료

①생화학 실험(Ⅱ) 2008년도 1학기 전반부 Basic Tools for Molecular
Cloning 연세대학교 생화학과
②Stryer Biochemistry Sixth Edition Freeman
③Naver and other Internet site
④조교님께서 제공해주신 자료(procedure 수정본...)