결과8 플라스미드추출

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최초 등록일: 2016.08.01
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1. 서론
▶▷ DNA연결
DNA 조각을 벡터에 삽입하는 과정은 비교적 단순하다. 우선, 단일 EcoRl 제한자리를 가진 플라스미드 벡터가 존재 하게 된다. EcoRl으로 벡터를 자르면 플라스미드는 선형 DNA가 된다. EcoRl은 서로 상보 적인 5'-돌출성 말단(5 -protruding end)들을 만들어내기 때문에 그 점착성 말단(sticky end)들이 재결합하여 2개의 틈(nick)을 지닌 원형의 DNA가 재형성된다. DNA 연결효소(DNA ligase)와 ATP를 처리하여 틈을 봉합하면 공유 결합적으로 닫힌 원심(covalently closed circle)의 DNA가 재형성된다. 이 경우에는 표적 DNA를 제한효소 EcoRI으로 잘라 삽입 DNA(insert DNA)를 만든다. 점착성 말단이 혼성화할 수 있는 조건 하에서 벡터 DNA와 EcoRl으로 자른 과량의 삽입 DNA를 혼합한다. DNA 연결효소를 이용하여 두 DNA의 호환성 호환성 말단(compatible end)들을 연결시킨다. 플라스미드 DNA 양에 비해 상대적으로 과량의 삽입 DNA를 첨가하면 대부분의 벡터는 삽입 DNA와 결합한다.

참고 자료

생명과학 길라잡이 6판, 2009(전상학 외 20명, (주)라이프 사이언스)
http://ushin612.blog.me/70105731641 - 충무공 실험실 블로그

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