DNA plasmid 정제

소개글

E. coli cell에서 plasmid DNA를 정제하는실험. 실험은 preparation of cell, lysis of cell, recovery of plasmid DNA의 순서로 진행했다. E. coli cell은 Alkaline lysis solution을 통해 세포벽, 세포막이 파괴되었고 plasmid DNA를 제외한 DNA, 단백질, 염, RNA는 phenol, 100%, 70% ethanol, TE buffer를 이용해 제거하였다.
실험관련 원리 및 시약조사, 주의사항이 모두 조사되있고 discussion이 한페이지가 넘게 잘되있습니다.

목차

1.title
2.purpose
3.principle
4.reference
5.material
6.methods
7.results
8.discussion
9.conclusion

본문내용

1.title
플라스미드 DNA 정제

2.purpose

세균에서 플라스미드 DNA를 직접 정제하여 추출하는 법을 익힌다.

3.principles

(1) 플라스미드 DNA

Plasmid DNA란 염색체 밖에 존재하는 DNA(extrachromosomal circular DNA)이다. Plasmid DNA는 그 자체 내에 replication origin을 가지고 있어서 박테리아 내에서 염색체 DNA 복제와 상관없이 독자적으로 복제되는 특징이 있다. 박테리아의 항생제에 대한 내성이 한 세포에서 다른 세포로 옮겨질 때 plasmid를 통해

<중 략>

(2) Plasmid DNA분리

Plasmid DNA분리는 주로 miniprep이라고 부르는 방법으로 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 이 방법은 plasmid를 지니는 세포를 액체배지에서 배양하여 수확하고 cell extract를 하면 된다. 여기서 extract는 단백질을 제거하고 에탄올 침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다. 박테리아 세포로부터 plasmid DNA를 소량으로 분리하는 방법은 매우 많지만 대표적으로 Alkaline lysis prep, boling method, lithium-based procedure 방법이 있다.

-Alkaline lysis miniprep

Alkaline lysis procedure은 가장 일반적으로 쓰이는 분리방법으로, plasmid DNA는 plasmid을 지니고 있는 박테리아에서 적은 양의 배양으로 분리될 수 있다. 박테리아는 sodium bodecyle sulfate(SDS), NaOH를 함유하는 용액으로 처리하여 용균된다. 여기서 SDS는 박테리아 단백질을 변성시키며 NaOH는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 변성시킨다.
다음 POASSIUM ACETATE를 첨가하여

참고 자료

없음