[생명공학실험 예비레포트]Plasmid DNA Isolation

소개글

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) Plasmid DNA Isolation의 필요성
2) Plasmid DNA
3) 기능에 따른 Plasmid DNA의 분류
4) 모양에 따른 Plasmid DNA의 분류
5) E.Coli
6) Spectrometer(nano drop)
7) 흡광도
8) Plasmid DNA isolation 방법
9) 형질전환
10) 형질전환 방법
11) 벡터
12) 분리정제
13) Plasmid DNA isolation이 사용되는 DNA재조합의 적용 예시

4. 기구 및 시약
1) 기구
2) 시약
3) 사전 준비

5. 실험 방법

6. 참고 사항
1) Bioneer AccuPrep Plasmid Extraction Kit(K-3030-1)
2) Resuspension buffer(RS)
3) lysis buffer(BL)
4) Neutralization buffer(NE)
5) Denaturation buffer(DE)
6) Elution buffer(EA)
7) Rnase A powder

본문내용

3) 실험 목적
- 형질 전환된 E.coli 내에 있는 플라스미드 DNA를 분리해낸다.
- 플라스미드 DNA에 대한 이해와 Kit를 사용한 분리 제정법을 배운다.
- E.coli 를 배양한 후, Plasmid DNA를 추출하고 Nano Drop(spectrometer)으로 농도를 측정한다.

4) 실험 이론
∎ Plasmid DNA Isolation의 필요성
- 현재, 생명공학은 주로 핵산과 단백질을 이루며, 그 출발은 생명체의 유전 암호를 담고 있는 DNA로부터 시작된다.
- Plasmid DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 Vector DNA로 사용되며, 원하는 DNA 단편을 넣어 다양한 유전자 클로닝(Cloning)과 단백질 발현 등에 널리 이용된다.
- Plasmid DNA는 E. Coli에서 증식되며, 유전자 조작을 위한 Vector DNA로 사용되기 위하여 대량 증식된 E. Coli로부터 분리되어 사용된다.
- E. Coli 내에서 염색체 DNA와는 별도로 존재하기 때문에, Plasmid DNA Isolation은 염색체 DNA가 포함되지 않게 분리하는 방법이 사용된다.
- 유전자 치료가 현대의학으로 완치가 불가능한 난치병을 치료할 수 있는 유일한 대안으로 인식되어 이 유전자 치료의 한 과정으로써 사용된다.
- 복제, DNA시퀸싱, 형질감염 및 유전자 치료와 같은 많은 절차에서 필수적이다.
- 세포 내에 DNA는 일반적인 double-helix 형태를 가지는 반면 plasmid는 토포아이소머 레이즈(topoisomerase)에 의해 supercoiled 형태를 가짐으로써 pH변화에 따라서도 plasmid의 형태와 구조가 크게 변하지 않는 것을 이용하여 순수한 plasmid만을 추출

참고 자료

없음