protein preparation

소개글

protein preparation

목차

Propose
Materials
Method
Results and Discussion
Reference

본문내용

Propose
protein extraction, protein precipitation, separation, dialysis를 실습해보고
실습을 통해 개념을 확실히 이해하자

Materials
lysozyme 10mg이 들어있는 EPtube, 20mM Tris(pH 8.0)100mM NaCl, E.coli,
centrifuge, 1mM EDTA, 5% Triton X-100 350ul, Ammonium sulfate, 전자저울,
pH 미터기

Method
1. Lysozime 10mg이 들어있는 EPtube에 20mM Tris(pH 8.0) 100mM NaCl을 xml 넣어 10mg/ml stock solution을 만든다.

2. 37`C에서 키운 E-coli Cell을 EPtube에 1.0ml씩 2개 만든다.

3. Centrifuge Max 2min 돌려 pellet(침전물)을 얻는다.

4. 각각의 EP-tube에 담긴 pellet을 20mM Tris(pH 8.0), with 0.1M NaCl, 1mM EDTA, 5% Triton X-100 350ul를 넣어 잘 풀어준다.

5. Lysozyme stock solution을 각각의 EP-tube에 25ul씩 넣어준 뒤 상온에서 부드럽게 inverting 해준다(20~30min)

6. Centrifuge Max 5min 돌려 supernatant(상등액)을 다른 EPtube에 모은다.

7. Ammonium sulfate를 precipitation table에 따라 Max 80%까지 10% 단위로
넣어주며 부드럽게 섞어 녹여준다. (넣은 AS가 다 녹으면 다음 10% 투입)

8. 다 녹은 후 10min incubation한 뒤 centrifuge Max 2min 돌려 sup을 버리고
침전물을 얻는다.

9. 침전물을 20mM Tris(pH8.0) 100mM NaCl을 1ml 넣어 부드럽게 풀어준다.

10. 잘 풀은 침전물을 Dialysis bag에 넣어 dialysis 실시.
- 20mM Tris(pH 8.0), 100mM NaCl buffer 200ml 2회

참고 자료

http://ask.nate.com/qna/view.html?n=4985773
http://blog.naver.com/shinek20?Redirect=Log&logNo=90015024016
http://en.wikipedia.org/wiki/Triton_X-100
생물물리, 기기분석
분자세포생물학 실험노트