생물학 실험; Plasmid DNA 추출 및 전기 영동

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이론만 있습니다.

목차

제한효소
DNA denaturation
Renaturation(annealing)
전기영동 (또는 전기이동)
Alkaline lysis miniprep
plasmid분리에 사용하는 시약

본문내용

제한효소
DNA를 절단하는 세균이 가진 효소
DNA를 정해진(제한된) 장소에서 절단하기 때문에 이 이름이 붙었다. 본래는 대장균에 감염한 파지의 DNA를 절단하는, 세균의 자기 방어를 위한 효소. 다양한 세균에서 여러 가지 종류의 제한효소가 발견되고 있다.
유전자 재조합 기술에서는 DNA를 겨냥한 장소에서 절단하기 위해 제한 효소를 이용하고 있다.
제한 효소로 절단된 DNA는 DNA 리가아제라는 효소로 이어져 합칠 수 있다. 가위 역할을 하는 제한 효소와 풀 역할을 하는 DNA 리가아제는 유전자 재조합에 필요 불가결한 도구이다.

DNA denaturation
1.double helix strand(이중 나선 구조)가 풀려 single strand로 분리되는 현상
2.melting curve: spectrophotometer로 OD 260 nm에서의 흡광도로 측정. OD 260nm의 파장에서는 DNA의 염기가 잘 흡수할 수 있는 빛의 파장이다.
3.melting temperature(Tm): DNA가 50% denaturation이 일어난 상태의 온도를 말하는 것으로 아래 그림을 보면 약 73℃에서 Tm값을 보인다. DNA가 풀리는 과정에서 DNA의 점도(vicosity)가 낮아지고 UV흡수는 증가한다.

Tm값을 기준으로 왼쪽의 낮은 온도에서는 ds DNA가 많이 존재하므로 OD 260nm의 흡광도 값이 낮은데 이는 DNA의 염기가 당, 인산 골격의 내부에 위치하고 있기 때문에 흡수량이 적은 것이다. 반대로 Tm값의 오른쪽의 상대적으로 높은 온도에서는 DNA의 염기가 밖으로 노출되어 있는 ss DNA의 형태가 많기 때문에 OD 260nm의 흡광도 값이 높게 나타난다.

참고 자료

없음