플라스미드 전기영동 실험보고서

목차

1. Date
2. Subject
3. Object
4. Theory & Principle
5. Material
6. Method
7. Result
8. Discussion & Conclusion
9. Reference

본문내용

Date : 2018. 10. 24

Subject : Plasmid DNA 전기영동

Object : 1. DNA 전기영동 이론숙지
2. plasmid DNA 전기영동 및 visualization

Theory & Principle

<전기영동(Electrophoresis)>
전기영동이란 전하를 가지는 분자가 반대 전하를 가지는 전극을 향하여 이동하는 것을 이용해서 모양과 크기를 기준으로 분자들을 구분하는 실험 기법이다.
생체 내 단백질, 아미노산, DNA, RNA, 금속이온, 저분자물질 등의 물질의 전하가 외부로부터 주입된 전기장에 반응하여 정량 분석을 할 수 있는 실험 기법으로 활용되고 있다. 전기영동 장치에서 부하되는 전압이 높을수록 물질의 이동속도는 빨라진다.
DNA의 뼈대를 형성하는 많은 인산그룹은 각각 음전하를 띠기 때문에 전기영동 중에 양극으로 끌려가는 모습을 관찰할 수 있다. 대부분 DNA 조각들은 단위 길이당 동일한 수의 음전하를 가지고 있어, DNA의 이동속도는 분자의 크기에 따라 달라지지 않는다. DNA 전기영동 실험에서는 gel의 그물구조 통과 기준을 통해 분자의 크기를 구분할 수 있다.

<아가로스 겔(Agarose gel)>
해초에서 추출한 다당류, 한천에서 유래된 아가로스(agarose) 분자가 꼬여있는 형태로 뭉쳐서 겔 형태로 굳어 미세한 단백질 섬유조직 그물망을 형성한다, 뜨거운 한천 용액을 식혀 응고하여 얻어지며, 고체 형태의 3차 구조는 수소결합을 통해 이루어진다. 아가로스 겔의 크고 작은 구멍들은 단단하면서도 유연한 구조로, DNA나 단백질과 같은 분자들이 전기영동을 통해 이동하는데 유용하다. 다음은 아가로스의 농도에 따라 DNA가 효율적으로 분리될 수 있는 범위를 보여주고 있다.
아가로스 겔을 너무 낮은 농도로 희석하게 되면 단단하지 못해 찢어지기 쉬워 다루기 까다롭게 되고, 너무 높은 농도로 희석하게 되면 DNA의 이동이 잘 이루어지지 않아 크기별 DNA 분리가 잘 이루어지지 않게 된다.

참고 자료

알기 쉽고 재미있는 분자생물학 4판 (라이프사이언스 출판 / 2013년)
David P. Clark, Lonnie D. Russel 저
Brock의 미생물학 (PEARSON 출판 / 2011년)
Madigan 외 3명 저
두산백과