[분자유전학실험]2.Competent cell prep & Transformation of E. coli

소개글

실험서입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
유용한 protein을 많이 만들기 위한 gene cloning을 하기 위해서는 저번 실험에 만들어진 재조합 DNA를 bacteria 세포 내로 주입하는 형질전환 과정이 필요하다. 형질전환을 하기 위해서는 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 competent cell이 필요한데, 이번 실험은 필요한 competent cell을 직접 만들어보고 만들어진 competent cell에 재조합 DNA를 넣어주어 형질전환 시키는 실험이다.
E. coli (DH5-α)를 kit를 사용해 Competent cell의 상태로 만들어 주고, 만들어진 competent cell에 지난 실험에서 제조한 ligation mixture를 주입해준다. 이 때 control은 ligation mixture대신에 D.W.를 넣어주도록 하며, 세포의 막을 열고 주입하기위해 E. coli 에 일반적으로 잘되는 heat shock를 가해주도록 한다. 마지막으로 이렇게 transformation된 균주를 ampicillin agar plate에 도말해서 하루 동안 배양한 뒤 콜로니의 수를 측정한다.
Control의 경우 colony 가 하나도 생기지 않았으며, ligation mixture를 넣어준 경우에는 colony가 하나도 생기지 않은 것이 있었고 8개의 colony와 4개의 colony가 발견된 것이 있었다. colony가 생기지 않은 Control은 원래의 항생제 내성을 가지지 못한 Competent cell이 생장하지 못한 것이며, colony가 생긴 것은 첨가해준 ligation mixture이 Competent cell에 잘 끼어들어가 형질전환이 일어났기 때문에 Ampicillin대한 내성을 가진 균주가 살아남아 생장하여 colony가 생겼다고 볼 수 있다. 하지만 colony의 개수가 20~50개 사이에 나와야 가장 이상적이며 유효성이 있는 건데 우리 조는 그보다 밑으로 나왔으니 그게 형질전환 된 건지는 확신할 수 없다고 본다.


2. Introduction

• 형질전환

형질전환(transformation)이란 외부 DNA(유전자)를 숙주세포 내에 넣어주어 세포가 원래의 성질과는 다른 새로운 유전형질을 추가로 얻게 되는 것을 말한다. 1928년 그리피스(F.Griffith)가 수행한 비병원성 폐렴쌍구균을 병원성 균으로 바꾼 실험이 최초의 형질전환 실험이다. 항생제 저항성 유전자를 포함한 플라스미드 백터를 항생제에 민감한 박테리아에 도입하여 항생제 저항성을 가진 박테리아로 그 형질을 전환시키는 것이 형질전환의 좋은 예다.

참고 자료

유전공학의 이해 / 남상욱, 권혁빈 / 라이프사이언스 / 2008.07.20 / p89-90