protease 활성도

*영*

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1. 실험 원리
protease를 적당한 농도의 casein 용액에 작용시킨다. 단백질 제거제인 trichloroacetic acid를 가하여 미분해의 단백질을 침전시켜 제거한 용액에 Folin 시약을 가하면 생성된 tyrosin에 의하여 반응액이 청색으로 착색된다. 이것을 분광광도계에 의하여 비색정량하는 방법이다. O.D.값이 높을수록 단백질이 분해되어 생성된 tyrosin의 함량이 높고, 즉 효소활성도가 높다.

2. 실험기구 및 시약
․ 시료 : neutrase(Nove Nordisk. neutrase 0.5L)
flavourzyme(Novo Nordisk, flavourzyme 500MG)
․ 시약 : 0.6% casein 용액, 0.1M 인산염완충용액(pH 6.0, 6.8), 0.1-NaOH 용액,
0.1-H3PO4용액, 0.44M trichloroacetic acid용액, 0.55M-Na2CO3
▶Folin 시약의 제조 방법
① 약 2L 들이의 밑이 둥근 플라스크에 약 700ml의 증류수를 넣고, 텅스텐산나트륨 (sodium tungstate) 100g과 몰리브덴산나트륨(sodium molybdate) 25g을 용해시켜 서 85% 인산 50ml와 진한 HCl 100ml를 가한다.
② 플라스크에 은박으로 싼 코르크마개 또는 고무마개에 환류냉각기를 장치하여 끓인다.
③ 1-2시간 만에 진한 녹색이 되나 10시간 동안 끓인다.

참고 자료

1. 강인수. 1997. 식품화학. 지구문화사. p180~181
2. 김창한. 1996. 식품분석. 고문사. p169~170
3. 채수규. 1998. 식품분석학. 지구문화사. p675~679
4. 진상근외 5명. 2006. 전통양념을 이용한 소스의 냉장저장 중 pH, 산도, 단백질 분해효소 활성도 및 미생물 변화. Korean J. Food SCI. ANI, RESOUR. Vol. 26. No. 2. pp, 159~165

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