실험 예비레포트(단백질 정제에서 GST, GSH, PMSF의 역할)

목차

1. 단백질 정제에서 GST와 GSH의 역할-단백질 분리과정
2. 단백질 정제에서 PMSF의 역할
3. 참고문헌

본문내용

1. 단백질 정제에서 GST와 GSH의 역할
GST(Glutathione S-transferase)는 GST tag에서 표지단백질로 작용한다.
GST와 GSH는 특이적이고 강한 결합력을 갖는다.

단백질 분리과정
① GST 서열을 목표 단백질 N말단에 삽입하여 혼합단백질을 만든다.
② 이 혼합 단백질을 분리하기 위해서 GSH가 결합되어 있는 bead를 사용하면 GSH bead와 혼합 단백질의 GST가 결합한다.
③ bead에 결합하고 있는 혼합단백질을 떼어내기 위해서 free GSH를 넣어 경쟁적 저해제로서 작용시켜서 GST는 bead-GSH대신 free GSH와 결합하면서 떨어져나온다.
④ 떼어낸 GSH와 혼합 단백질에 트롬빈(trombine)을 처리하면 GSH와 GST는 결합한 상태로, 목표 단백질은 따로 분리되어 목표 단백질만 얻을 수 있다.

참고 자료

위키백과, 「GST tag」, https://ko.wikipedia.org/wiki/GST_tag
Thermofisher Scientific, 「PMSF」,
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/36978#/36978