서울대 생물실험 E.Coli의 형질전환
- 최초 등록일
- 2012.02.18
- 최종 저작일
- 2007.10
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소개글
서울대 생물실험 E.Coli의 형질전환
목차
1. Introduction
2. Materials & Apparatus
3. Methods
3. Result
4. Discussion
5. References
본문내용
▶세포로부터의 플라스미드의 DNA 분리 정제
플라스미드 DNA의 분리정제를 하는 기본적인 방법은, 플라스미드함유 배양세포를 액체배지에서 배양하고 수거하여, DNA 추출을 위한 세포추출물의 DNA추출후, 단백질과 RNA를 차례로 제거하고, 에탄올로 DNA를 침전시킨다. 세균내 공존하는 많은 양의 DNA로부터 플라스미드만을 분리해내는 것이 어렵다. 플라스미드에 세균 DNA가 섞여 있으면 안된다.
여기서 세균 DNA를 제거하는 방법에는 두 가지가 있는데, 첫 번째는 물리적 차이에 의한 분리(가장 큰 플라스미드도 염색체 크기의 8%정도)이고, 두 번째는 구조(conformation)의 차이에 의한 분리(세균 선상, 플라스미드 환상) 이다.
크기에 의한 분리법은, 세균의 DNA를 깨지지 않게 분리하여 원심분리하여 세포 찌꺼기와 함께 제거하고, (세균염색체의 특징은 세포외벽에 쉽게 붙기 때문에 세포 찌꺼기와 함께 분리할 수 있다) EDTA, lysozyme은 설탕액을 첨가하여 처리(삼투압처리제)한다. 그 후 sphaeroplast(부분적으로 세포막이 없는 세포)가 되는데, 여기서 트라이톤 X-100(SDS와 같은 계면 활성제, DNA를 파괴)으로 처리하면 원심 플라스미드 DNA(정제 용해물; clearedlystae)를 정제할 수 있다. 주의 할 점 은 플라스미드 가 비교적 큰 경우 같이 갈아지지 않으며 DNA에 전혀 손상이 가지 않도록 정제하기가 어렵다.
참고 자료
․Advanced Cell Biology, L.M. Schwartz and M. M. Azar, Van Nostrand Reinhold Co., 1981, pp. 870-873
․http://bh.kyungpook.ac.kr/~ygpark/homekor/home7-4.htm
