대장균 내 도입유전자 발현, 식물 단백질의 추출과정, SDS-PAGE로의 단백질 확인

소개글

하나하나 실험해가며 도출된 결과를 바탕으로 작성한 소중한 실험 결과 레포트입니다. 학교에서 우수 보고서로 추천될 만큼 잘 쓰여졌고, 실험 결과뿐만이 아니라 실험 방법, 실험 원리, 그리고 실험을 이해하기 위한 사전 지식까지도 기재되어 있습니다. 물론 실험 결과와 그에 따른 분석도 기재되어 있으므로 필요한 주제와 일치되시다면 결제 후에 후회하시는 일은 없으실 것입니다. ^^*

목차

Introduction
- 1. Operon (lac-operon, ara-operon)
- 2. 단백질발현 Plasmid DNA map과 간단한 실험원리
- 3. SDS PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)
- 4. 식물 단백질

Material & apparatus

Methods
- 1. 대장균에서 외부 단백질 발현
- 2. 식물 단백질 추출
- 3. SDS-PAGE

Results & Discussion
- 1. 대장균 내 도입유전자 발현(3조)
- 2. 식물 단백질을 추출한 후, SDS PAGE로 확인(3조)

References

본문내용

- 3. SDS-PAGE
1. glass plate를 증류수로 깨끗이 닦고 70% EtOH로 다시 깨끗이 닦는다.
(plate가 깨끗하지 않으면 staining시에 background가 강해진다. 이때는 10% NaOH에 2시간
이상(overnight 좋음) 담근 후 닦는다.)
2. long plate를 놓고 가장자리로 tube를 둘러친다. 그리고 tube 안쪽으로 spacer를 양쪽에
넣는다. 그런 다음 short plate를 덮고 집게로 집어준다.
(tube, spacer등도 깨끗이 닦아야한다.)
3. casting 된 plate에 separating gel을 pipet을 이용하여 공기방울이 생기지 않게 조심스럽
게 넣는다.(처음에는 plate를 약간 기울여 용액이 spacer면을 타고 내려가게 하고, 양이 차면
서 plate를 바로 세우고 gel이 short plate의 윗면으로부터 3-4Cm가 될 때까지 채운다.
4. separating gel 윗면에 0.1% SDS 를 뿌려서 공기를 차단하고 plate를 수직으로 바로세우
고 30-60분 정도 gel을 굳힌다.
5. gel이 굳으면 윗면의 0.1% SDS를 부어내고 남은 것은 filter paper를 이용하여 gel이 다치
지 않게 조심스럽게 제거한다.
6. staking gel 을 끝까지 채우고 comb 을 꽃아 준다. 굳을 때까지 기다린다.
7. gel이 다 굳으면 집게를 제거 하고 tube를 제거한다. 그런 다음 plate을 kit에 집게를 이용
하여 설치한다. 이때 plate가 바닥에 닿지 않도록 한다.
8. E.buffer를 채우고 comb의 위치를 표시한 다음 comb 을 제거한다.
9. plate의 윗면과 아랫면을 공기방울과 오염물을 제거하기 위하여 E.buffer로 여러 번
washing한다.
10. sample을 준비하여 loading한다. 정 전류 10-15mA에서 실시한다.

참고 자료

없음