단백질의 정성시험

소개글

식품화학실험보고서

목차

(1) Ninhydrin 반응
(2) Xanthoprotein 반응
(3) Nitroprusside 반응
(4) 뷰렛반응

본문내용

(1) Ninhydrin 반응
▶ 실험 목적
Ninhydrin 반응을 이용해 아미노산 및 단백질을 확인한다.
▶ 실험 원리
Ninhydrin을 아미노산의 수용액에 가하면 청자색으로 변하는 발색반응이다. 아미노산과 ninhydrin을 가열 반응시키면 아래 그림에 나타낸 것처럼 아미노산의 산화분해가 일어나 환원된 ninhydrin과 암모니아, 이산화탄소, aldehyde가 생성되며 다음에 환원된 ninhydrin과 암모니아, ninhydrin이 반응하여 Ruhemann`s purple이라는 청자색의 색소가 생성한다. 이 발색은 예민하여 50~100만분의 1정도로 감도를 나타내므로 아미노산의 검출에 이용된다. 아미노산을 종이 chromatography등으로 전개하고 0.3% Ninhydrin의 부틸알코올용액을 분무하여 전아미노산을 검출 확인하는 방법이 흔히 쓰인다. 또, 비색정량에도 이용된다.
▶ 시약 및 기구
< 시료 >
- 0.1% glycine
- 0.1% phenylalanine
- 0.1% asparagine
- 0.1% proline
- 1% albumin
< 시약 및 기구 >
- H2O
- 1% Ninhydrin solution
- 1% ammonia 수
- test tube
- pipette
- tip
- water bath 등
▶ 실험방법
① 각 단백질 용액 1ml를 시험관에 옮긴다. 하나의 시험관에는 단백질 용액 대신 1ml의 증류수를 넣어 대조군으로 사용한다.
② 각 시험관에 1% Ninhydrin 용액 2~3방울을 떨어뜨린다.
③ ②를 water bath에 넣고 3~5분 가열한다.
④ 색변화를 관찰한다.
▶ 실험결과
glycine, phenylalanine, albumin (1%) → 청자색
proline → 황색
asparagine → 갈색
물 → 반응 없음

참고 자료

없음