단백질분리정제와 특성

소개글

생화학 레포트로 단백질 분리정제와 특성에 대해서
한 레포트 입니다.
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목차

Ⅰ 서론

Ⅱ 본론

1. 분리정제의 원리
1) 균질화(homogenization)
2) 원심 분리 (Centrifugation)
3) 칼럼 크로마토그래피(column chromatography)
① 겔 여과 크로마토그래피(Gel filtration chromatography)
② 이온 교환 크로마토그래피(Ion-exchange chromatography)
③ 친화성 크로마토그래피(Affinity chromatography)
4) 전기영동(Electrophoresis)
① SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)
② 등전점 전기영동(Isoelectric focusing)

2. 순수 분리된 단백질의 아미노산 결정방법
1) Polypeptide의 부분분해
2) 에드만 방법

3. 아미노산 조성

4. 분자량 측정방법

5. 생화학적 특성

Ⅲ 결론

Ⅳ 참고문헌

본문내용

② 이온 교환 크로마토그래피(Ion-exchange chromatography)
이온 교환 크로마토그래피는 주어진 pH에서 단백질의 총전하량과 극성을 이용하여 분리하는 방법으로 전하를 띤 불용성 물질인 이온 교환 수지를 이용하여 이온 화합물들을 분리한다. 이는 이온 교환 수지로 충전된 관에 분리하고자 하는 혼합물을 가하고 적당한 완충액으로 용출시키면 혼합물의 각 성분과 이온 교환 수지간의 상호 작용의 세기에 따라 각 물질의 이동속도에 차이가 생겨 서로 분리된다. 이온 교환 수지는 불용성인 합성수지, agarose, cellulose, dextran등에 양 또는 음전하를 갖고 있는 작용기를 결합시킨 것이다. 양이온과 결합할 수 있는 양이온 교환 수지는 -SO3-, -COO- 등의 음전하들 띤 작용기를 갖고 있으며 음이온과 결합할 수 있는 음이온 교환 수지는 -N+H3, -N+R3등의 양전하를 띤 작용기를 갖고 있다.
실제로 단백질을 분리할 때 음이온 교환 수지로는 diethyl-aminoethyl-cellulose (DEAE-cellulose)를 많이 사용하며, 양이온 교환 수지로는 carboxy-methyl-cellulose(CM-cellulose)가 많이 이용된다. 이들 이온 교환 크로마토그래피의 원리를 CM-cellulose 같은 양이온 교환 수지를 이용하여 설명하면 다음과 같다. pH 7.0에서 양전하를 띠고 있는 단백질은 교환 수지에 결합하나 음전하를 띠고 있는 단백질은 결합하지 않고 그대로 내려간다. 이온 교환 수지에 결합되어 있는 단백질은 용출액의 염 농도를 증가시켜 주면 이온 교환 수지로부터 떨어져 용출된다. 이때 단백질의 양전하와 염의 양이온간에는 이온 교환 수지의 결합부위에 경쟁적으로 작용하기 때문에 염의 농도를 증가시키면 단백질이 이온 교환 수지에 결합할 기회가 그만큼 감소되어 쉽게 떨어져 나온다. 양이온 교환 수지를 이용하여 단백질을 분리하면 양전하를 가장 적게 띠고 있는 단백질이 제일 먼저 용출되고 양전하를 가장 많이 띠고 있는 단백질이 가장 늦게 용출된다.

참고 자료

생화학 제5판, 곽한식 외 역, 라이프사이언스, 2007
생화학길라잡이, 박인국역, 라이프사이언스, 2004
레닌저생화학 제4판, 백형환 외 역, 월드사이언스, 2006