서강대 현대생물학실험1 Taq DNA Polymerase의 발현, 정제 및 재조합 단백질의 확인
- 최초 등록일
- 2021.11.06
- 최종 저작일
- 2021.04
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소개글
"서강대 현대생물학실험1 Taq DNA Polymerase의 발현, 정제 및 재조합 단백질의 확인"에 대한 내용입니다.
목차
Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials and Methods
1.Taq DNA Polymerase의 정제
2.PCR, 정제Taq DNA Polymerase의 확인
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
본문내용
- Abstract
이번 Taq polymerase의 정제 실험에서는 대장균 E.coli에서 Thermus aquaticus(Taq) DNA polymerase를 발현하고 정제한 것을 확인했다. 주변에서 쉽게 얻을 수 있는 세균인 대장균을 사용하였으며, Bacteria인 원핵생물로 실험체로 자주사용된다. Taq DNA polymerase는 적은 양으로도 증폭이 가능해 PCR(Polymerase chain reaction)에서 자주 쓰이는 DNA 중합효소이다. 높은 온도에서도 Denaturation이 일어나지 않아 다른 단백질과의 분리가 용이하다. 먼저 세포막과 세포벽을 파괴해야하기 때문에 Cell disruption을 진행하는데,Enzymatic method와 Detergent method를 사용한다. 그리고 황산암모늄(Ammonium sulfate)를 통해 용해도에 따른 분리인 Salting out을 진행하여 단백질을 침전시킨다. PCR등의 과정에서 불순물이 있으면 결과 차이가 많이 나기 때문에 protein dialysis를 진행해 Salting out을 위해 사용했던 물질들을 없애 순도를 높여주었다. 그리고 PCR과 Electrophoresis를 이용해 Taq DNA의 발현을 확인하고 DNA의 증폭이 잘 이루어졌는지 확인한다.
Taq DNA polymerase를위해 PCR을 하였고, EtBr을 넣은 Agarose gel 전기영동에서DNA의 band를 확인하였다. 1x Taq DNA Polymerase 에서의 PCR을 제외하고는 결과가 뚜렷하게 나타났고,이번 실험에서의 DNA size는 600~800bp(base pairs)였다.
- Introduction
E. coli는 주변에서 쉽게 구할 수 있고발현이나 세포의 복제가 빨라 실험에서 많이 쓰이는 숙주 세포이다. DNA수에 비해 유전자의 수가 높기 때문에 발현에 대한 실험에서 많이 사용된다.
참고 자료
Campbell et al. (2016), Biology, 11th edit., New York : Pearson, p.419.
T. A. Brown, Gene cloning and DNA Analysis, an introduction, Wiley-Blackwell, 2016, pp.6~7.
David L. Nelson, Michael M. Cox, Lehninger’s principles of biochemistry, W. H. Freeman, 2004, pp.92~93.
