RNA isolation

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최초 등록일: 2007.09.26
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* cell에 어떤 조건을 주었을 때(ex : hypoxia), cell 안에서 mRNA를 추출하여, 조건을 주지 않은 cell과 gene expression level을 비교하는데, 이번 실험에서는 cell에서 안전하게, mRNA만을 추출하는 것이다.

본문내용

1. 실험제목
RNA isolation
2. 실험일자
2006년 5월 22일
3. 제출자 및 공동 실험자
4. 목적
* cell에 어떤 조건을 주었을 때(ex : hypoxia), cell 안에서 mRNA를 추출하여, 조건을 주지 않은 cell과 gene expression level을 비교하는데, 이번 실험에서는 cell에서 안전하게, mRNA만을 추출하는 것이다.
5. 시약 및 기자재
① Trizol
( 세포가 파괴되면서 나오는 endogenous RNase를 억제 )
② Scrapper
③ Chloroform (for RNA)
( protein과 mRNA 분리시에, protein을 아래층으로 down 시키는 역할)
④ RNase-free 75% EtOH
⑤ RNase-free DW(DEPC-DW)
6. 방법
① Discard the medium and add 300㎕ of Trizol(per 5-10 x 106 cells)
(cell이 Trizol로 인해 깨어진다. 그럼, 안의 component들이 나와서 진득진득하게 된다.)
② Scrape the cells with scrapper and pass the cell lysate several times through a pipette
(cell이 고루 깨어지게 하고, 또한,
③ Transfer the sample to 1.5ml tube and pass

참고 자료

*http://blog.naver.com/shanti78?Redirect=Log&logNo=40017327147
*http://blog.naver.com/neoelf_/110001474937
*http://tong.nate.com/abffks2/7604544
*http://www.kjcp.co.kr/note/lecture%20note/mole/molecular%20note/mole-10.htm
*http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_25.php

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