DNA Cloning - vector cloning

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Vector cloning의 Ligation, Transformation 실험을 진행했다.

본문내용

Ⅰ. Introduction
1. 실험원리
1) Gateway Cloning
1990년대 후반부터 Invitrogen에 의해 발명되고 상용화된 Gateway cloning System은 재조합 sequence의 고유한 세트를 이용하여 연구자들이 DNA 조각을 플라스미드로 효율적으로 전달할 수 있게 하는 분자생물학적 방법이다. Gateway cloning System은 새로운 cloning 기술로서 DNA sequence, gene functional analysis, protein expression등에 적용이 가능하다. 또, site-specific recombination을 이용하여 DNA 단편의 vector간 이동을 가능하게 한다. 이 시스템은 기존의 제한 효소를 사용한 방식에 비해 손쉽고 빠르게 DNA 단편을 하나의 vector에서 하나 혹은 다양한 vector로 이동 가능하게 한다. 특히 이 시스템을 이용하게 되면 reading frame과 방향성을 그대로 유지한 상태로 gene이 이동하게 된다. 재조합 sequence의 고유한 세트는 "Gateway att" 자리와 "LR Clonase"와 "BP Clonase"라고 불리는 두 고유한 효소 혼합물로 이루어진다. Gateway Cloning 기법은 reading frame을 유지하면서 서로 다른 복제 벡터 간에 DNA 조각을 전달할 수 있게 한다. Gateway 를 이용하면 기능 분석을 위해 하위 clone DNA 단편을 복제할 수 있다. 이 시스템은 "Gateway Entry clone"(특유의 Invitrogen 명명법)을 만들기 위해 " att L 1"과 " att L 2"라는 두 개의 측면 재조합 sequence가 있는 플라스미드에 DNA 조각을 처음 삽입하는 것을 필요로 한다.
인간, 마우스 및 쥐 ORF(open reading frames)의 대부분을 포함하는 Gateway Entry clones의 대규모 저장소는NIH(National Institute of Health)

참고 자료

강영희, 생명과학대사전, 2008년, 아카데미서적
이정주, 유전학원론, 2013년, 월드사이언스
한국유전학회, 유전학실험서, 2004년, 라이프사이언스
Wikipedia: ‘Gateway Cloning’, ‘PAM’, ‘ccd’

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