[과 수석, 평점 4.5 자료 인증사진 첨부] Enzyme kinetic assay Horseradish Peroxidase

소개글

화공생물공학단위조작1 과목에서 A+ 학점을 받은 레포트 입니다.
2-2, 3-1 학기 모두 평균 평점 4.5받은 학생입니다.
레포트를 작성할 때, 참고문헌을 꼼꼼히 다 기록해놓아 참고하시면 큰 도움되실 것이라 생각합니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Materials & Methods
가. 실험 기구 및 시약
나. 실험 방법

4. Results

5. Discussion

6. Conclusion

7. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험에서는 spectrophotometer를 이용하여 HFP(horseradish peroxidase)에 의한 기질의 변화를 측정하여, 효소 반응속도론의 기본이 되는 Michaelis-Menten 방정식을 이해한다. 총 2가지 방법으로 Michaelis-Menten 방정식을 통해 Km, Vmax, Kcat을 구해본다. 또한 결과를 도출하는 과정에서 필요한 이론들을 조사해본다.

2. Introduction
가. Michaelis-Menten 방정식
Michaelis-Menten kinetics는 생화학분야에서 가장 잘 알려진 효소와 반응속도론에 관한 모델 중 하나이다.

나. 효소 반응속도론 (Enzyme reaction kinetics)
단일 기질-효소 촉매 반응의 속도식은 Michaelis-Menten 속도 식을 기본으로 한다. 생물계에서는 다기질-다효소 반응과 같은 보다 복잡한 효소-기질간 상호 작용이 일어날 수 있다. 효소는 기질과 결합할 수 있는 활성 부위의 숫자가 일정하기 때문에 높은 기질 농도에서는 활성 부위 모두가 기질과 결합하여 효소가 포화되는 상태가 된다.
효소 반응속도론은 다음과 같이 효소(E)–기질(S)의 복합체(ES) 형성 단계의 가역반응과 ES 복합체의 비가역 해리 단계의 2단계의 반응체계로부터 구할 수 있다.
식 8.1
위 반응 체계는 ES 복합체가 다소 빠른 속도로 형성되고 두번째 단계의 역반응속도를 무시한다는 가정을 전제로 한다. 두번째 반응의 비가역가정은 반응 초기에 생성물의 축적을 무시할 때 성립된다.
① 빠른 평형(rapid equilibrium approach) 가정
② 유사 정상상태(quasi-steady-state approach) 가정
유사 정상상태 또는 빠른 평형을 가정하여 효소 반응속도식을 유도할 때 초기 단계는 두 경우가 동일하다. 반응속도 v는 생성물의 생성 속도 또는 기질의 소모 속도로서 moles/L•s의 단위를 갖는다.

참고 자료

박상권 외 7명, 『화공생물단위조작실험1』, 2021-1, P. 59-62 (실험 강의 교재)
Sigmaaldrich. Enzymatic Assay of Peroxidase (EC 1.11.1.7) 2,2'-Azino-bis(3-Ethylbenzthiazoline-6-Sulfonic Acid) as a Substrate“.
https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/enzymatic-assay-of-peroxidase-abts-as-substrate.html.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”ABTS“. 2021년 11월 27일.
https://en.wikipedia.org/wiki/ABTS.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”Hydrogen peroxide“. 2021년 5월 11일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Hydrogen_peroxide.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”Monopotassium phosphate“. 2021년 5월 12일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Monopotassium_phosphate.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”Dipotassium phosphate“. 2021년 2월 25일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Dipotassium_phosphate.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”Lineweaver–Burk plot“. 2021년 5월 4일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Lineweaver%E2%80%93Burk_plot.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”Turnover number“. 2021년 4월 29일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Turnover_number.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”Enzyme“. 2021년 5월 14일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Enzyme.
accessed 2021년 5월 18일
위키백과. ”Beer–Lambert law“. 2021년 4월 20일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Beer%E2%80%93Lambert_law.
accessed 2021년 5월 18일
네이버 지식백과. ”분광 광도계“.
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=269952&cid=42641&categoryId=42641.
accessed 2021년 5월 18일