[세포학실험] MTT assay

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목차

1. 실험방법
2. 실험결과
3. 실험고찰
4. 참고문헌

본문내용

● 실험방법

1) 4-well plate에 배양된 세포에 PBS, 1μM, 10μM, 100μM의 항암제를 각각 1,2,3,4번 well에 처리하고 1시간동안 incubator에 둔다.
2) 각 well에 MTT solution을 50㎕씩 넣는다.

3) 37℃가 유지되는 shaking incubator에서 1시간동안 4-well plate를 방치한다.

4) formazan 위에 떠있는 배양액과 MTT solution을 pipette을 이용하여 제거한다.

5) 4-well plate에 DMSO를 각각 500㎕씩 넣고 37℃가 유지되는 shaking incubator에서 30분간 방치한다.

6) 96-well plate에 4-well plate의 용액을 각각 200㎕씩 두 번 옮긴다.

7) Spectrophotometer로 595㎚의 wavelength에서 지정된 범위의 흡광도를 측정한다.

8) 컴퓨터에 나타난 결과값을 이용하여 그래프를 그린다.

● 실험결과

실험결과를 보면, 1조와 3조의 결과는 PBS만 넣은 1번 결과보다 2번의 항암제가 10nM만큼 배양액에 들어간 결과가 더 높은 흡광도를 보였다는 것을 보여준다. 반면 2조의 결과는 PBS만 넣은 1번 well의 결과보다 2번의 항암제가 10nM 농도 만큼 배양액에 첨가된 well의 결과가 더 낮은 흡광도를 보여준다. 1조와 3조의 결과를 보면 항암제가 100nM만큼 배양액에 들어간 3번 well의 흡광도보다 항암제가 1000nM만큼 배양액에 들어간 4번 well의 흡광도가 더 높았다는 결과를 보여준다.

참고 자료

黑木登志夫, 허남호, 배양실험핸드북, 월드사이언스, 2007, pp. 30, 82-85.
김승업, 세포배양 : 하나부터 열까지 알아보기, 자유아카데미, 2008, pp. 10-11, 28-43, 61-65, 71, 80-81, 87-93, 135, 142-143.
㈜ 다인바이오연구소, 세포 증식 및 사멸도 변화 평가, 2013.
한국물리학회, 물리학백과, 분광광도법.
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5810515&cid=60217&categoryId=60217
WiCell, Feeder dependent(MEF) culture protocol – collagenase passaging, 2012
https://www.stembook.org/node/732
Fisher scientific, Eppendorf™ Replacement Drums for Eppendorf™ Cell Culture Roller Drum
https://www.fishersci.se/shop/products/replacement-drums-new-brunswick-cell-culture-roller-drum-2/p-156357
Dorothea Fichter-Fechner, Rotating shaker for suspension cell cultures in the CO incubator
https://trends.medicalexpo.com/binder-gmbh/project-80398-420628.html
Yassine Mrabet, Essential parts of a spectrophotometer, 2008
https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Spetrophotometer-en.svg