HPLC 결과보고서

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목차

I. 이론적 배경 및 실험방법
1. 이론적 배경
1) OD600과 microbial growth

2. 실험방법
1) Analysis of microbial growth

II. Result & Discussion
1. Result
0) Standard curve
1) Result : Wild type(E.coli K12 MG1655, aerobic)
2) Result : DSM01, aerobic
3) 예측을 요하는 미생물
2. Discussion

III. 출처

본문내용

Microbial growth를 assess하는 기본적인 방법들 중 하나인 optical density는, 미생물들이 자라고 있는 액체배지를 600nm 파장의 빛으로 투과시켰을 때 배지에서 빛이 흡수하는 비율로 생장의 정도를 예측한다. Solution 내의 입자는 투과한 빛을 산란시키고 따라서 더 많은 입자가 solution 속에 존재한다는 것은 산란되는 빛의 양이 증가로 이어지는데, 이는 bacteria와 yeast의 growth가 활발하게 일어나 배지속의 미생물 수가 증가한다면 더 많은 빛을 산란시켜 더 높은 absorbance 값을 보이는 결과를 얻어낼 수 있다. 따라서, 이러한 비례관계를 이용하여 OD값이 1일 때 1ml 안에 들어있는 세포 수가 108개라는 것을 바탕으로 비례식을 세워서 특정 OD값에서의 세포수를 예측할 수 있고, 시간에 따라 변화하는 용액 배지의 OD값 변화를 확인하고 이를 그래프로 그리면 microbial growth curve를 얻을 수 있다. 다만 이 curve는 OD값이 일정 값 이상으로 커지게 될 경우 실제 값과 차이가 나는 경향성이 있어서 실험 전체 오차 발생의 원인이 될 수 있다. 더 정확한 그래프를 얻기 위해서는 임계 흡광도 값 이하의 용액으로 만들어주기 위한 dilution 과정이 추가적으로 필요하다.

참고 자료

Analysis of bacterial metabolites by using High Performance Liquid Chromatograph(HPLC). 2019년 2학기 화공생명공학실험. 고려대학교 공과대학 화공생명공학과. pp. 3 ~ 22.
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Pyruvate decarboxylase. Available at: https://proteopedia.org/wiki/index.php/Pyruvate_decarboxylase
Heo, M. J., Jung, H. M., Um, J., Lee, S. W., &Oh, M. K. (2016). Controlling citrate synthase expression by CRISPR/Cas9 genome editing for n-butanol production in Escherichia coli. ACS synthetic biology, 6(2), 182-189.