comet assay(single cell gel electrophoresis)

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목차

1. Title
2. Date
3. Purpose
4. Introduction
5. Materials
6. Methods
7. Result
8. Discussion
9. Reference

본문내용

single cell gel electrophoresis (SCGE)라고도 하는 Comet Assay는 진핵 생물과 원핵 생물 세포에서 DNA 가닥의 절단량을 측정하는 간단한 방법이다. 현재 alkaline comet assay, neural comet assay, 세포자살 level의 측정 등 분자독성학 분야에서 활용이 많이 되고 있다. 높은 염과 NaOH 등으로 인해 용해되어 nuclear matrix와 연결된 supercoiled loop of DNA를 포함하는 nucleoid를 형성한다. alkaline buffer에 의해 핵막이 분해되고, base 사이의 결합이 끊어진다. 그리고 높은 PH에서 electrophoresis를 진행하고 형광 현미경으로 관찰하면 혜성꼬리 모양의 모습이 나타난다. 이때, tail intensity는 DNA breaks의 절단량에 비례한다. 이 분석법은 유전자 독성에 대한 새로운 화학물질을 검사하거나, 환경오염을 모니터링할 수 있으며, 인간과 관련한 분자 역학 실험과 모니터링, 그리고 근본적으로 DNA 손상과 수리에 대한 연구에도 응용될 수 있다.

참고 자료

CometAssay® Reagent Kit for Single cell Gel electrophoresis , Trevigen® Instructions, Catalog # 4250-050-K
comet assay: an essential tool in toxicological research, Glei M 외 2명, 2016 Oct;90(10):2315 ~36, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27378090
[네이버 지식백과] DNA 복구 [DNA repair] (생화학백과)
Cell cycle and genetic requirements of two pathways of nonhomologous end-joining repair of double-strand breaks in Saccharomyces cerevisiae , Moore JK and Haber JE , May 1996, 16 (5): 2164–73. PMC 231204. PMID 8628283.
SYBR® Gold Nucleic Acid Gel Stain, Invitrogen™, catalog # S11494
Alkaline and neutral Comet assay profiles of sperm DNA damage in clinical groups, J. Ribas-Maynou 외 5명, Oxford academy, 16 January 2012, https://academic.oup.com/humrep/article/27/3/652/641157