Western blotting report

목차

1. Introduction
2. Result
3. Discussion
4. Reference

본문내용

1) primary Ab : gel에서 NC membrane으로 넘어온 단백질 중 원하는 epitope에 결합 한다. primary Ab를 붙이기 전에 일단 blocking 과정을 거친다. NC membrane은 단백질이 잘 붙는 성질을 가졌기 때문에 단백질을 target 으로 하는 antibody가 부착해서 잘못된 결과가 나올 가능성이 있다. 이 를 방지하기 위해 skim milk TBST를 사용해 blocking을 하는 것이다. skim milk에 포함된 단백질이 NC membrane의 target protein이 없 는 부분에 부착하기 때문에 primary antibody를 부착할 때 antibody 가 target protein에만 결합한다. 그 다음에 TBST(TBS+tween20)으로 wash하면 결합하지 않은 antibody가 제거된다. Primary antibody는 검출하고자 하는 protein에 특이적으로 결합하는 것으로 사용해야 한 다. Blocking에서 사용하는 sample 속에 존재하는 target protein 이 외의 다른 단백질이나 skim milk의 protein과 결합하면 안된다.

참고 자료

https://en.wikipedia.org/wiki/Chemiluminescence
https://en.wikipedia.org/wiki/Western_blot
https://en.wikipedia.org/wiki/Horseradish_peroxidase
https://en.wikipedia.org/wiki/Polysorbate_20
https://en.wikipedia.org/wiki/Skimmed_milk
https://www.bio-rad-antibodies.com/western-blot-troubleshooting.html