생물화학공학실험 Restriction of DNA

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
제한효소를 이용하여 DNA를 자르고, 잘려진 DNA 단편을 전기영동을 이용하여 크기 분석을 하는 실험이다. 주어진 조성으로 반응용액을 만든 후 일정한 온도(37℃)에서 반응시켜 준다. 그 후 TAE buffer를 넣고 전기영동법을 이용하여 제한효소를 처리한 DNA와 처리하지 않은 DNA의 크기를 비교해 본다.

<중 략>

2) 실험방법
(1) 반응 용액을 만든 후 10μl pipette으로 섞어준다.
(2) 37℃에서 1시간 반응한다.
(3) 전기영동기기에 Agarose gel을 넣고 0.5ⅹTAE buffer를 잠길 때까지 채운다.
(4) Agarose gel의 첫 번째 홈에 DNA ladder 2μl를 loading한다.
(5) loading star (6X) 2μl와 반응한 DNA 10μl를 섞은 뒤 두 번째 홈에 loading한다.
(6) 대조군으로, loading star 2μl와 반응하지 않은 DNA 10μl를 섞은 뒤 세 번째 홈에 loading한다.
(7) 25분 동안 전기영동을 한다.

<중 략>

4. Discussion
Restriction을 전체적으로 요약해보면 PCR을 이용하여 대량으로 복제한 DNA Plasmid를 제한효소를 이용하여 필요한 부분을 자르는 것이다.
이렇게 잘려진 DNA를 전기영동법을 이용하여 확인하는 것 까지가 이 실험의 마무리가 되겠다. EcoR1이란 제한효소는 균에서 얻어지고 나머지 모든 제한효소도 균에서 주로 얻어진다. 또한 primer나 polymerase와 같이 제한효소마다 최적의 온도가 다르다. 제한효소의 형태에는 두 가지가 있는데 type1과 type2가 되겠다. type1은 특별한 서열을 인식하고 target지역 이외를 자르고 type2는 인식한 범위 내 에서만 자른다. type2가 두 개의 단일 가닥을 자르게 될 때 두 가지 형태를 띠게 되는데 중심이 잘려 대칭을 이루는(blunt end)와 중심이 아닌 주변이 잘리게 되는 경우(sticky end)가 두 형태이다.

참고 자료

없음