[생물화학공학및실험 A+] Restriction of DNA
- 최초 등록일
- 2021.01.18
- 최종 저작일
- 2019.03
- 9페이지/ 한컴오피스
- 가격 2,000원
소개글
[생물화학공학및실험] 세번째 실험입니다.
[Restriction of DNA]
문의사항은 언제든지 답글 남겨주세요.
감사합니다.
목차
1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference
본문내용
1. Abstract
이번 실험의 목표는 제한 효소를 이용하여 plasmid DNA를 자르고, 잘린 DNA 단편을 Agarose-gel 전기영동을 통해 크기를 분석하여 이론값과 비교하는 것이었다. 본 실험에 사용한 plasmid DNA는 유전자 재조합된 pET-22b(+)이며, 사용한 10X H buffer와 제한효소는 모두 다카라바이오㈜ 제품이다. 제한효소의 종류는 NdeⅠ, EcoRⅠ, XhoⅠ 세 가지를 사용하였으며 모두 Ⅱ형(Type Ⅱ)에 해당한다. 실험 결과 약 0.8kbp, 1.7kbp, 5.5kbp 크기의 세 DNA 절편이 얻어진 것을 관찰할 수 있었으며, 이론값과 비교하였을 때 오차가 거의 없음을 확인하였다. 마지막으로 다른 조에 비해 선명하지 못한 결과 값을 얻은 원인과 함께 제한효소 사용에 있어 주의할 점들을 고찰하였다.
* 제한효소의 분류
제한효소는 반응에 필수적인 인자와 절단부위의 특성 등에 따라 Table 1.과 같이 3가지 형으로 분류할 수 있다.
이중에서 유전자공학 실험에 이용하고 있는 것은 일반적으로 II형 효소로서, 본 실험에서도 II형 효소를 사용한다. 제한효소는 반응조건, 기질 DNA의 종류에 따라 절단상황, Star 활성의 출현빈도 등의 차이가 관찰되며, 그 정도도 효소에 따라 다르게 나타난다.
① 효율성 : 점착말단이 평활말단보다 높으며 이는 점착말단에 튀어나온 단일사슬이 다른 DNA 단편과 끈끈한 상보적 결합을 할 수 있기 때문이다.
② 편의성 : 평활말단이 점착말단보다 시간적으로 유리하다. 점착말단은 저온에서 오랜시간 방치하여 염기끼리 결합할 수 있는 시간을 주어야 효율이 상승하지만 평활 말단은 상온에서 바로 Ligase(중합효소)를 처리할 수 있기 때문이다.
(3) TAE buffer(Tris Aceteate+EDTA Buffer)
전기 영동시 DNA가 양극으로 이동할 때 운반체 역할을 한다.
참고 자료
McClelland, M. and Nelson, M. (1993) Nucleic Acids Res. 2 1 , 3139-3154.
pET-22b(+) vector Protocol.
KOMABIOTECH㈜ 홈페이지
TaKaRa, unpublished observations.
Neil A. Campbell외 4명, 2011, “Campbell Biology : Concepts & Connections, 7th Edition”, Pearson, p166~p169, p221