miniprep

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mini-prep 후 전기영동으로 결과 확인까지의 과정입니다

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목적 : Recombinant plasmid DNA(Hc LPR+pGEM easy vector)가 들어있는 E.coli에서 plasmid를 직접 추출해본다. 그 후, 추출한 plasmid DNA를 특정 제한효소로 잘라 insert가 plasmid와 제대로 결합했는지 전기영동으로 size를 확인해본다.
서론 : mini-prep은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다. 이때 세균이 원래 가지는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이 중요한데, chromosomal DNA는 분리과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이러한 성질의 차이를 이용해 분리해낼 수 있다.
1) 세포벽을 깨는데 이때 세포막은 유지되도록 한다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 하며 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다.

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