sequencing

소개글

sequencing

목차

sequencing

1. 실험 목적
2. 원리
ㄱ. sanger`s method
ㄴ. 자동화된 서열 분석법
ㄷ.maxam-gilbert method
ㄹ. PEG down

본문내용

1. 실험 목적
miniprep을 통해 얻어진 DNA 조각의 정확한 염지 서열 분석 (sequencing)을 통해 이 DNA의 종류나 기능을 규명할 수 있을 것이다. sequencing 의 두 개지 방법인 sanger와 maxam-gilbert의 서열 분석법에 대한 원리적인 이해가 뒷받침 상태에서 sequencing 을 해야한다.

2. 원리
ㄱ. sanger`s method
DNA polymerase가 template를 따라 5‘-3’방향으로 complement sequence를 만드는 성질을 이용하여, d NTP와 ddNTP (2`3`-didecleoxy nucleotide: 3`의 OH가 H 로 바뀌어서 다음 nucleotide 와 phosphodiester bond를 형성할 수 없음 ) 를 적절 비율로 섞어서 polymerization 반응을 하고, 이것을 polyacrylamide gel에서 전기 영동을 한 후, 그 sequence 를 읽는 방법.
핵심)ddNTP
sanger`s method에서는 ddNTP를 더 넣어 주는 것빼곤 PCR 과 동일 하다. ddNTP는 C-3에 OH-group대신 H가 달려 있는것 빼고는 dNTP와 동일하다.

참고 자료

없음