[생화학]Plasmid Purification

소개글

생화학 실험 예비 리포트

목차

1.실험제목:
2.날짜,시간:
3.이름:
4.실험목적:
5.실험원리:
6.시약 및 기구:
7.실험방법:

본문내용

4.실험목적:
Plasmid DNA의 원형을 유지하는 구조적 특징을 이용하여 Alkaline lysis 방법과 CsCl 밀도 기울기 법에 의해 Plasmid DNA를 떼어 낸다.
5.실험원리:
Ⅰ. Plasmid 란?
-플라스미드는 박테리아의 세포안에 존재하는 박테리아 크로모좀 이외의 작은 원형의 DNA분자 이다. 형태는 원형이고, 이중 나선으로 되어 있으며, 박테리아의 유전자와는 독립적으로 분열할 수 있는 능력을 가지고 있다. 그러한 이유로 유전자 클로닝을 위한 벡터로 많이 사용되는 것 중 하나다.
벡터란 유전자 클로닝시에 우리가 원하는 유전자를 숙주 세포안으로 이동시켜 그 안에서 다량으로 복제 가능하도록하는 일종의 운반체를 말하며, 플라스미드는 그를 위한 조건을 가지고 있다. 우선 자가 복제를 위한 복제 기점 (origin of replication)을 가지고 있으며, 유전자의 발현, 즉 삽입된 유전자의 전사를 유도하는 promoter, 나중에 세포 배양에 의한 대량 생산후에 플라스미드가 들어간 세포와 그렇지 않은 세포를 구별해 내기위한 selective marker, 그리고 숙주안에서의 copy number 를 조절하는 replicon, 그리고 원하는 유전자를 끼워 넣을 수 있는 insertion site 등을 가지고 있다. insertion site는 제한 효소에 의해 잘려질 수 있는 부위인데 거기로 우리가 복제를 원하는 유전자를 삽입할 수 있는 것이다.

<플라스미드의 종류>
플라스미드는 세포의 생존에 필수적인 기능을 수행하는 염색체(chromosome) 과 별도로 존재하기 때문에 이상적인 환경 조건 하에서는 세포의 생존에 꼭 필요하지는 않다. 하지만 세포는 자신의 생존에 필요없는 물질은 세포 밖으로 방출(pumping out)하려 하고, 세포의 생존 조건이 항상 이상적인 것은 아니다. 따라서 플라스미드는 세포의 생존에 도움이 되는 유전자를 갖고 있고, 이러한 유전자가 수행하는 역할에 따라 플라스미드를 분류할 수 있다.

참고 자료

없음