DNA의 추출

목차

I. 실험 목표

II. 실험 이론
1. 플라스미드
2. DNA
3. EDTA
4. Plasmid DNA의 추출방법

III. 참고문헌

본문내용

◎ 실험 목표
플라스미드라는 염색체이외의 자가복제 DNA의 분리를 통하여 DNA의 추출 및 정제방법의 원리를 배우고, DNA의 이화학적 특성을 이해한다.

◎ 실험 이론
1. 플라스미드
* 플라스미드는 박테리아의 세포안에 존재하는 박테리아 크로모좀 이외의 작은 원형의 DNA분자이다. 형태는 원형이고, 이중 나선으로 되어 있으며, 박테리아의 유전자와는 독립적으로 분열할 수 있는 능력을 가지고 있다. 그러한 이유로 유전자 클로닝을 위한 벡터로 많이 사용되는 것중 하나이다. 벡터란 유전자 클로닝시에 우리가 원하는 유전자를 숙주 세포안으로 이동시켜 그 안에서 다량으로 복제 가능하도록하는 일종의 운반체를 말하는데. 플라스미드는 그를 위한 조건을 가지고 있다. 우선 자가 복제를 위한 복제 기점 (origin of replication)을 가지고 있고, 유전자의 발현, 즉 삽입된 유전자의 전사를 유도하는 promoter, 나중에 세포 배양에 의한 대량 생산후에 플라스미드가 들어간 세포와 그렇지 않은 세포를 구별해 내기위한 selective marker, 그리고 숙주안에서의 copy number 를 조절하는 replicon, 그리고 원하는 유전자를 끼워 넣을 수 있는 insertion site 등을 가지고 있다. insertion site는 제한 효소에 의해 잘려질 수 있는 부위인데. 거기로 우리가 복제를 원하는 유전자를 삽입할 수 있다. 플라스미드와 항생제의 관계를 selection 에 있다. 유전자 클로닝 시에 플라스미드가 들어간 숙주세포와 그렇지 않은 세포를 가려낼때 이용하는것 중 하나가 플라스미드가 가지는 항생제 저항성 유전자 이다. 플라스미드는 한개 또는 2개 이상의 항생제 저항성 유전자를 가진다. 이 유전자는 항생제를 분해할 수 있는 물질을 생산해 내는데, 플라스미드를 숙주 세포에 넣은 후 에 항생제가 들어간 배지에서 배양을 하면, 숙주 세포 중에서 플라스미드가 들어간 것은 플라스미드의 항생제 저항유전자 덕분에 살아 남을 수 있지만, 플라스미드가 들어가지 않은 숙주 세포는 항생제 저항 물질을 생산하지 못하기 때문에 죽게 된다.

참고 자료

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