Plasmid DNA의 추출

목차

1. 실험목적
2. 실험이론
3. 재료및 기구
4. 실험방법
5. 결과 분석 및 디스커션

본문내용

Introduction
1. 실험 목적
Alkaline lysis 법을 이용하여 Plasmid DNA를 추출한다.

2. 실험 이론
➀ Plasmid DNA의 추출
주로 miniprep라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis의 원리는 세균의 세포벽과 세포막을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 Plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 다행히 chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다.

➁ Plasmid DNA의 구조
- 대부분의 plasmid는 세포내에서 초나선형(supercoiled)분자로 존재한다.
- topoisomerase라는 효소에 의한 (plasmid) 복제과정 동안에 Plasmid DNA의 이중 나선 구조가 부분적으로 풀려 초나선형(supercoiled)이 생겨난다.
- 초나선형 구조는 두 개의 polynucleotide 가닥이 완전할 때만, 즉 닫혀진 공유결합성 원형 DNA(covalently closed-sircular DNA, cccDNA) 일 때 유지된다.

참고 자료

김경훈 외 8인. 『대학 생물학 실험』. pp. 126-131.
이길재. 『생명과학 이론과 응용 제8판』. pp. 220-222.