Agarose gel electrophoresis of DNA

소개글

Agarose gel electrophoresis of DNA

목차

1. 전기영동이란
2. 전기영동의 종류
3. Agarose 란
4. Agarose gel의 특성
5. DNA의 구조
6. Agarose gel 전기영동법
7. 실험시 주의사항
8. Agrose gel 1% 제조

본문내용

Agarose gel electrophoresis of DNA
전기영동이란
전기영동의 목적
원하는 단백질의 유무 확인, 분자량을 이미 알고 있는 단백질과 비교하여 분자량 산출
☆ 전하를 띠고 있는 물질이 전기장 내에서 움직이는 성질을 이용하여 그 물질을 분리, 분석하는 방법
→ 생체 내의 고분자 중에는 핵산 및 단백질이 전하를 띠고 있는 대표적인 물질

전기장 안에서 하전된 입자가 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 이용
이동하는 속도는 입자의 전하량과 크기, 모양, 용액의 PH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기 등 여러 가지 요인에 의해 결정
전하밀도가 동일한 분자 : 크기 순으로 분리
전하밀도가 다른 분자 : 성질에 따라 분리

<중 략>

→DNA의 가시화
EtBr을 미리 넣어 전기영동하는 방법과 전기영동이 끝난 후 염색하는 방법의 경우 그 결과가 달라짐
○ EtBr을 미리 넣을 경우
ⅰ) DNA의 이동속도가 최고 15%까지 줄어든다
ⅱ) DNA의 서열차이에 따른 이동거리의 차이가 줄어든다
EtBr의 구조

실험시 주의사항
EtBr은 발암물질이므로 신체에 닿지 않도록 각별히 주의를 기울이고, 관련 기기와 소모품들은 특별관리 및 처분
UV광학기의 자외선을 눈으로 직접 쐬자 않도록 주의
만들어진 Agarose gel에 시료를 주입할 때 피펫의 끝이 다른 곳을 찌르지 않도록 주의하고 90도 직각 아래로 너무 깊숙이 찌르지 않도록 하며, 천천히 주입한다
전기영동 tank와 gel은 동일한 전기영동 완충액을 사용
Agarose용액을 주형에 부을 때, 기포가 생기지 않도록 주의

Agrose gel 1% 제조
500ml 삼각플라스크에 Agarose 1.2g??and 1X TAE 120ml을 넣는다.* 필요에 따라서 agarose를 가감하여 Gel 농도를 조절하여 사용한다.(TAE는 증발할 것을 고려하여 조금 더 넣어 주는 것이 좋다.)

참고 자료

없음